نام پژوهشگر: مهدی مهدی پورمهدی بروجنی
علی محبت مسعود قربانپور نجف¬آبادی
ویروس بیماری بورس عفونی، vp3، کلونینگ، الیزا بیماری بورس عفونی، یکی از بیماری¬های بسیار واگیر طیور است که در صنعت طیور در سراسر جهان باعث زیان¬های اقتصادی می¬شود. پس از عفونت با ویروس اولین آنتی¬بادی¬ها بر ضد vp3 ظاهر می-شود، بنابراین پروتئین نوترکیب vp3 می تواند آنتی¬ژن مطلوبی برای استفاده در الیزا ¬باشد. در این مطالعه ژن vp3 ویروس بیماری بورس عفونی با استفاده ازآزمایش rt-pcr تکثیر داده شد و سپس با استفاده از پلاسمید پروکاریوتی بیانی pmal-c2x در e.coli کلون گردید. بیان پروتئین vp3 در آزمایشات sds-page و وسترن بلاتینگ بررسی ¬شد و سپس برای تایید نهائی سکانس ژن کلون شده مورد ارزیابی قرار گرفت. در ادامه پروتئین نوترکیب با استفاده از ستون کروماتوگرافی حاوی رزین آمیلوز خالص ¬گردید و برای پوشش دادن حفرات پلیت الایزا استفاده شد. با بهینه سازی، پارامترهای مهم این آزمایش شامل میزان آنتی¬ژن در هر حفره و رقت سرم¬های آزمایشی، نوع بلوک کننده و در آخر رقت مناسب کنژوگه تعیین ¬گردید. پس از این مرحله عملکرد آزمایش طراحی شده با انجام آزمایش بر روی 226 سرم تهیه شده بررسی¬ شد. در پایان میزان همبستگی نتایج آزمایش طراحی شده با نتایج بدست آمده از آزمون خنثی سازی و کیت الایزای تجاری آیدکس گامبورو تعیین گشت. آزمون مک نمار و آماره کاپا مشخص کرد که میزان همبستگی بالایی بین نتایج الایزای vp3، آزمایش خنثی سازی ویروس و الایزای تجاری وجود دارد. این یافته¬ها حاکی از آن بود که الایزای طراحی شده با vp3، آزمایشی حساس و اختصاصی است و می¬تواند جهت ساخت یک کیت الایزای تجاری مورد استفاده قرار گیرد.