نام پژوهشگر: سمیه طبخی

جداسازی و تخلیص و تعیین ویژگی های بیوشیمیایی آنزیم لیپواکسیژناز از تخم کتان (flaxseed (linum usitatissimum
پایان نامه وزارت علوم، تحقیقات و فناوری - دانشگاه فردوسی مشهد - دانشکده علوم پایه 1393
  سمیه طبخی   محمد رضا حسین دخت

در این مطالعه، آنزیم لیپواکسیژناز (lox, ec 1.13.11.12)از تخم کتان flaxseed (linum usitatissimum) استخراج شد و در طی سه مرحله شامل: رسوب دهی با آمونیوم سولفات، کروماتوگرافی غربال مولکولی و کروماتوگرافی تبادل آنیونی با q-sepharoseبه میزان 81/262 برابر خالص گردید. وزن مولکولی آنزیم تخلیص شده با روش sds-page، 98 کیلو دالتون تخمین زده شد. بهترین فعالیت آنزیم در محدوده 8-7 ph = و حداکثر فعالیت آنزیم در 5/7 = ph به دست آمد. دمای بهینه آنزیم لیپواکسیژناز °c 45 است. فعالیت آنزیم پس از نگه داری با یون های فلزیfe+2،cu+2،ca+2، mg+2 و mn+2 در غلظت mm01/0، افزایش یافت. در حضور غلظت یک میلی مولار یون های na+ و co+2 فعالیت آنزیم کاهش یافت. غلظت¬های افزایشی triton x-100، sds، pmsf، ctab،edta و ?- مرکاپتواتانول باعث مهار فعالیت آنزیم lox شد. فعالیت آنزیم در حضور غلظت ((v/v10% حلال های آلی شامل ایزو- آمیل الکل و اتانول به ترتیب 109% و 5/112 % افزایش یافت. اثر چندین حلال آلی شامل: تولوئن، هگزان، متانول، دی اتیل اتر و کلروفرم، بر فعالیت آنزیم لیپواکسیژناز نشان داد که این حلال¬ها سبب کاهش فعالیت آنزیم می شوند. کمیت های kmو vmaxدر حضور سوبسترای لینولئیک اسید در phبهینه (5/7 = ph) به ترتیب µm16/2 و m min-1µ 014/0 به دست آمد .کمیت ic50 برای پتاسیم سیانید، آسکوربیک اسید و بتاکاروتن به ترتیب µm146،µm 80 و µm 2 تعیین شد. با توجه به نتایج بدست آمده از لیپواکسیژناز تخم کتان می توان از آن به صورت یک مدل برای مطالعه روابط ساختار- عمل و شناخت سازوکار آنزیمی استفاده کرد.