نام پژوهشگر: صبا اصلانی

تشخیص سریع قارچ verticillium dahliae عامل بیماری پژمردگی ورتیسلیومی درختان زیتون با استفاده از فن آوری lamp
پایان نامه دانشگاه بین المللی امام خمینی (ره) - قزوین - پژوهشکده فنی و مهندسی 1392
  صبا اصلانی   حسین جعفری

بیماری پژمردگی ورتیسلیومی، که توسط قارچ verticillium dahliae ایجاد می¬شود، یکی از مهم¬ترین بیماری¬های زیتون در دنیا می-باشد. روش¬های مولکولی متعددی جهت استخراج dna از قارچ v. dahliae به منظور استفاده از آن¬ها در روش¬های تشخیص مولکولی ارایه شده است که اغلب مبتنی بر pcr هستند. تکنیک lamp روش جدیدی جهت تشخیص بسیاری از عوامل بیماری¬زا به خصوص ویروس¬های آلوده کننده گیاهی می¬باشد که در آن تمام واکنش¬ها، با اختصاصیت و سرعت بالا می¬تواند تحت شرایط هم¬دما انجام شود و نیازی به تجهیزات گران قیمت ندارد. دراین پژوهش از تکنیک lamp برای تشخیص دقیق و سریع قارچ عامل بیماری پژمردگی ورتیسلیومی زیتون استفاده شد. همچنین کارآیی سه روش استخراج dna از میسلیوم قارچ و از بافت چوب برای استفاده در واکنش lamp مورد بررسی قرار گرفت. برای این منظور، dna ژنومی قارچ با استفاده از سه روش: روش ctab، روش سریع استفاده از naoh و روش اصلاح شده استخراج dna از چوب، استخراج شد. بعد از ارزیابی کمی وکیفی dna استخراج شده، واکنش lamp با استفاده از آغازگرهای اختصاصی طراحی شده و dna الگو استخراج شده با سه روش فوق انجام شد و در نهایت با بهینه¬سازی شرایط واکنش، قارچ عامل بیماری شناسایی گردید. در ادامه دقت و حساسیت این تکنیک با روش مبتنی بر nested-pcr مقایسه شد. نتایج نشان داد علی رغم کمیت متفاوت dna، واکنش لمپ حساسیت بالایی در تشخیص اختصاصی قارچ عامل بیماری دارد. به کار گیری روش اصلاح شده استخراج dna از بافت چوب درختان بیمار، بدون نیاز به کشت و خالص¬سازی قارچ عامل بیماری، مدت زمان تشخیص آلودگی درختان به قارچ ورتیسلیوم را به طور چشم¬گیری کاهش داد. همچنین نتایج این پژوهش نشان داد که روش lamp در مقایسه با روش nested-pcr ازسرعت، دقت و حساسیت بیشتری در تشخیص قارچ برخوردار است و می¬تواند روش جایگزین مناسبی برای روش فوق در غربال¬گری درختان آلوده به قارچ در باغات زیتون باشد.