نام پژوهشگر: دنیا اسماعیل پور
دنیا اسماعیل پور فخری السادات محمدی
در این تحقیق برهمکنش سه ترکیب پلی فنولی طبیعی جنیستین، کامفرول و رزوراترول با لیزوزیم سفیدهی تخم مرغ مورد مطالعه قرار گرفته است. لیزوزیم یکی از آنزیمهای مونومری با کد e.c.3.2.1.17 است و با نامهای مورامیداز وn- استیلمورامید گلیکانهیدرولاز نیز شناخته شده است. جنیستین (4،5،7-تریهیدروکسی ایزوفلاون) با نام آیوپاک 5،7-دیهیدروکسی-3-(4-هیدروکسیفنیل)کرومن-4-اون یکی از ایزوفلاونوئیدهای طبیعی در گیاهانی مانند دانههای سویا و نخود است. کامفرول (3،4،5،7-تتراهیدروکسیفلاون)، با نام آیوپاک 3،5،7-تریهیدروکسی-2-(4-هیدروکسیفنیل)-h4-4-کرومن-4-اون، است و از چای و بروکلی استخراج میشود. ترانس- رزوراترول (3،4،5-ترانس-تریهیدروکسیاستیلبن) یک پلی فنول فیتوآلکسین است که در انواع گونههای گیاهی از قبیل بادام زمینی و انگور وجود دارد. با توجه به اهمیت خواص بیولوژیکی و دارویی سه ترکیب جنیستین، کامفرول و رزوراترول و همچنین ویژگیهای بیولوژیکی لیزوزیم، در این تحقیق برهمکنش لیگاندهای یاد شده با پروتئین لیزوزیم سفیدهی تخم مرغ با استفاده از فلورسانس حالت پایا، فلورسانس سینکرونس، کالریمتری روبشی تفاضلی، طیفسنجی دو رنگنمایی دورانی، آشکارسازی فیبریلهای آمیلوئید، انتقال انرژی از پروتئین به لیگاند و طیفسنجی مرئی-فرابنفش انجام شد. نتایج آزمایشهای تیتراسیون فلورسانس نشان داد که برهمکنش هر یک از سه لیگاند مذکور با لیزوزیم با تشکیل کمپلکس غیر فلورسنت بین لیگاند و پروتئین با استوکیومتری 1:1 همراه است. مقادیر ثابت استرن-ولمر (ksv)، ثابت خاموشی دومولکولی (kq) و ثابت پیوندی (ka) از آنالیز دادههای فلورسانس به دست آمد. بررسی انتقال انرژی از لیزوزیم به هر یک از لیگاندهای مذکور نشان داد که این سه لیگاند در نزدیکی تریپتوفان 62 در جایگاه پیوندی به فواصل 8/2 تا 4 نانومتر قرار گرفتهاند. در بررسی طیفهای سینکرونس مشاهده شد که لیگاندهای موردنظر در فرایند برهمکنش با لیزوزیم به دنبالههای تریپتوفان نزدیکاند و قطبیت محیط اطراف آنها را تغییر میدهند. مطالعهی طیفهای circular dichroism (cd) فرابنفش دور نشان میدهد که تغییر بسیار چشمگیر و شاخص در ساختار دوم پروتئین لیزوزیم به واسطهی برهمکنش با جنیستین، و رزوراترول رخ نمیدهد ولی تغییرات نسبتاً چشمگیری در کامفرول مشاهده میشود. در بررسی نتایج آمیلوئیدی مشخص شد که افزایش غلظت لیگاندهای کامفرول و رزوراترول باعث کاهش تجمع آمیلوئیدی لیزوزیم شده است که این کاهش در رزوراترول بسیار بیشتر از کامفرول دیده شده است. همچنین در مطالعهی گرماسنجی روبشی تفاضلی برهمکنش سه لیگاند جنیستین، کامفرول و رزوراترول با لیزوزیم مشاهده شد که tm لیزوزیم (دمایی که پروتئین 50 درصد به صورت واسرشته و 50 درصد به صورت باز شده وجود دارد) با افزایش هر سه لیگاند مذکور افزایش مییابد که نشان دهندهی افزایش پایداری لیزوزیم در حضور لیگاندها است.