نام پژوهشگر: بهاره پارسی
بهاره پارسی ابوالقاسم اسماعیلی
در چند سال اخیر پروتئینهایی مشابه با گیرندههای معمول کموکاینی شناسایی شده اند که با به دام انداختن کموکاینها و به عنوان گیرندههای decoy، باعث تنظیم شبکهی کموکاینی میشوند. این گروه از پروتئینها به واسطهی به درون کشاندن و تخریب کموکاین، انتقال و یا ارائهی آن به گیرندههای معمول، فعالیت گیرندههای کموکاینی را تحت تأثیر قرار میدهند. با وجود این قابلیتها و همچنین عدم توانایی در ایجاد مسیرهای پیام رسان درون سلولی توسط این پروتئینها، این گروه گیرندههای کموکاینی غیرمعمول یا خاموش نامیده میشوند. با وجود شناسایی گیرندههای کموکاینی خاموش، عملکردهای دقیق اعضای این گروه در حال بررسی است. گیرندهی کموکاینی ccrl1 (ackr4) یکی از این نوع گیرندههاست که قابلیت اتصال به کموکاینهای ccl19,ccl21 و ccl25 را داراست و با درونسازی و تخریب این کموکاینها میتواند باعث تنظیم میزان این کموکاینها در محیط شود. به علاوه با توجه به نقشی که این کموکاینها در رشد و متاستاز سلولهای سرطانی دارند، ccrl1 میتواند با کاهش این کموکاینها به عنوان عاملی درمانی در نظر گرفته شود. همچنین ccrl1 با ایجاد هترودایمر با برخی از گیرندههای کموکاینی معمول، باعث ممانعت از برقراری مسیرهای پیامرسان درون سلولی و مهاجرت سلولها میشود. برای شناسایی بیشتر این پروتئین و فهم عملکردهای دقیق آن، اولین مرحله به دست آوردن سلولهایی است که قادر به بیان این پروتئین باشند. به این منظوردر این پژوهش ابتدا قطعهی کد کنندهی این پروتئین با استفاده از آنزیمهای محدودالاثر hindiii و xbai و آنزیم dna لیگاز t4در ناقل بیانی حاوی برچسب مولکولی flag وارد شد. پس از ترانسفکشن سلولهای کلیهی جنینی انسان از نوع hek293t با روش لیپوفکشن، بیان ccrl1 در سطح mrna با استفاده از rt-pcr تأیید شد. در سطح پروتئین نیز با روشهای مختلف دات بلات، وسترن بلات و فلوسیتومتری با کمک آنتیبادی اولیهی anti-flag و آنتیبادیهای ثانویهی مناسب، بیان ccrl1 مشاهده گردید. نتایج این پژوهش نشان میدهد این سلولها قادر به بیان ccrl1 بوده و در مراحل بعدی تحقیقات میتوان از این سیستم استفاده کرد.