نام پژوهشگر: مسعود رضا صیفی¬آباد شاپوری
صدیقه عزیزی ابرقوئی مسعود رضا صیفی¬آباد شاپوری
استافیلوکوکوس آرئوسرایج ترین عامل عفونی ورم پستان مسری گاوان است که منجر به ضرر های اقتصادی در صنعت تولید شیر می شود. عوامل چسبان باکتری که سبب اتصال آن به ماتریکس خارج سلولی بافت میزبان می شود، از جمله مهمترین فاکتور های حدت استافیلوکوکوس آرئوسهستند و پروتئین متصل شونده به فیبرونکتین یکی از مهم ترین عوامل چسبان به شمار رفته و سبب چسبندگی و تهاجم به بافت میزبان می شود. از آنجایی که وزن مولکولی بالای (185کیلو دالتون) این پروتئین بیان و خالص سازی میزان بالای آن را مشکل می سازد،هدف از این مطالعه کلونینگ و بیان ناحیه ی متصل شونده به لیگاند (du-----d4) ژن سازنده ی fnbp استافیلوکوکوس آرئوسدر باکتری e.coli سویه ی tg1بود. ژن مورد نظر در پلاسمید pmal-c2xکلون گردید و در باکتری e.coliسویه ی tg1بیان شد. بیان پروتئین با استفاده از روش sds-page بررسی شده و صحت ردیف نوکلئوتیدی محصول کلون شده با تعیین توالی نوکلئوتیدی مورد تایید قرار گرفت. نتایج نشان داد که پلاسمید نوترکیبفوق پروتئین متصل شونده به فیبرونکتین را به صورت کارا بیان می کند، بنابرین می توان در مطالعات بعدی، ایمنی زایی و محافظت کنندگیآن دربرابرعفونت های ناشی ازاستافیلوکوکوس اورئوسرا مورد سنجش قرار داد.
علی محبت مسعود قربانپور نجف¬آبادی
ویروس بیماری بورس عفونی، vp3، کلونینگ، الیزا بیماری بورس عفونی، یکی از بیماری¬های بسیار واگیر طیور است که در صنعت طیور در سراسر جهان باعث زیان¬های اقتصادی می¬شود. پس از عفونت با ویروس اولین آنتی¬بادی¬ها بر ضد vp3 ظاهر می-شود، بنابراین پروتئین نوترکیب vp3 می تواند آنتی¬ژن مطلوبی برای استفاده در الیزا ¬باشد. در این مطالعه ژن vp3 ویروس بیماری بورس عفونی با استفاده ازآزمایش rt-pcr تکثیر داده شد و سپس با استفاده از پلاسمید پروکاریوتی بیانی pmal-c2x در e.coli کلون گردید. بیان پروتئین vp3 در آزمایشات sds-page و وسترن بلاتینگ بررسی ¬شد و سپس برای تایید نهائی سکانس ژن کلون شده مورد ارزیابی قرار گرفت. در ادامه پروتئین نوترکیب با استفاده از ستون کروماتوگرافی حاوی رزین آمیلوز خالص ¬گردید و برای پوشش دادن حفرات پلیت الایزا استفاده شد. با بهینه سازی، پارامترهای مهم این آزمایش شامل میزان آنتی¬ژن در هر حفره و رقت سرم¬های آزمایشی، نوع بلوک کننده و در آخر رقت مناسب کنژوگه تعیین ¬گردید. پس از این مرحله عملکرد آزمایش طراحی شده با انجام آزمایش بر روی 226 سرم تهیه شده بررسی¬ شد. در پایان میزان همبستگی نتایج آزمایش طراحی شده با نتایج بدست آمده از آزمون خنثی سازی و کیت الایزای تجاری آیدکس گامبورو تعیین گشت. آزمون مک نمار و آماره کاپا مشخص کرد که میزان همبستگی بالایی بین نتایج الایزای vp3، آزمایش خنثی سازی ویروس و الایزای تجاری وجود دارد. این یافته¬ها حاکی از آن بود که الایزای طراحی شده با vp3، آزمایشی حساس و اختصاصی است و می¬تواند جهت ساخت یک کیت الایزای تجاری مورد استفاده قرار گیرد.