نام پژوهشگر: عباس پرهام

جداسازی و شناسایی سلول های بنیادی مزانشیمی از مغز استخوان اسب
پایان نامه وزارت علوم، تحقیقات و فناوری - دانشگاه فردوسی مشهد - دانشکده دامپزشکی 1392
  مرتضی زاهدی   عباس پرهام

با توجه به نیازهای فراگیر پزشکی و دامپزشکی در زمینه طب ترمیمی، تحقیقات در زمینه سلول های بنیادی به میزان زیادی مورد توجه قرار گرفته است. سلول های بنیادی مزانشیمیِ چندتوان، از بافت های مختلف چندین گونه ی حیوانی جدا شده اند. هدف این مطالعه جداسازی و شناسایی سلول های بنیادی مزانشیمی از مغز استخوان اسب بود. بدین منظور از 3 مادیان نمونه مغز استخوان اخذ شد و در آزمایشگاه، سلول های تک هسته ای آن جدا و کشت داده شد. پس از پاساژ سوم، بررسی های ریخت شناسی، بیان ژن در سطح mrna (ژن های cd29، cd34، cd44، cd90، mhc-i، mhc-ii، sox-2 و nanog) به روش rt-pcr و در سطح پروتئین (ژن های پرتوانی nanog، ssea-1، ssea-3 و ssea-4) به روش ایمنوسیتوشیمی، خصوصیات رشد و همچنین قابلیت تمایز سلول های جدا شده به سه رده استخوانی، غضروفی و چربی انجام شد. نتایج نشان داد که سلول های جدا شده شبه فیبروبلاست بوده و به کف ظرف کشت می چسبند، در سطح mrna مربوط به ژن های cd29، cd44، mhc-i و sox-2 را بیان کرده و ژن های cd34 و mhc-ii را بیان نمی کنند. همچنین بیانی از پروتئین های nanog، ssea-1، ssea-3 و ssea-4 در سلول ها مشاهده نشد. این سلول ها قابلیت تمایز به هر سه رده استخوانی، غضروفی و چربی را دارا بودند. در مجموع، نتایج حاصله موید این بود که سلول های جداسازی و کشت داده شده، از نوع بنیادی مزانشیمی بوده و امید است در آینده بتوان از این سلول ها در طب ترمیمی اسب استفاده نمود.

اثر تجویز مکرر داروی تیوپنتال در دوران نوزادی، بر میزان بیان ژن های gad65 و gad67 قبل و بعد از بلوغ در هیپوکامپ موش صحرایی نر نژاد ویستار
پایان نامه وزارت علوم، تحقیقات و فناوری - دانشگاه فردوسی مشهد - دانشکده دامپزشکی 1392
  مسعود ناصری   علی مقیمی

روند تکوین سیسنم عصبی در انسان و حیوانات تا مدتی پس از تولد ادامه دارد. نقش این دوران حیاتی در شکلگیری مدارهای نورونی دارای عملکرد صحیح در مطالعات متعددی مورد تایید قرار گرفته است. تاثیر عوامل فارماکولوژیک بسیاری در این دوران بر چگونگی شکل گیری سیستم عصبی و عملکردهای رفتاری شخص، یا حیوان بررسی شده است. باربیتورات ها عملکرد گابا میمتیک دارند و بر گیرنده های این میانجی در سیستم عصبی اثر می کنند. گابا در دوره ی تکوین مغز به عنوان یک میانجی تحریکی است که پس از پایان این دوران به اصلی ترین میانجی مهاری مغز تبدیل می شود. طی دوره ی تکوین با اتصال گابا یا آگونیست های آن به گیرنده ی gabaa در سطح غشا، سلول با خارج شدن یون منفی کلر و ورود یون کلسیم از کانال های ولتاژی تحریک اتفاق می افتد. میزان یون کلسیم داخل سلولی در محدوده ی بسیار ظریفی کنترل می گردد چرا که افزایش نامتعارف مقادیر درون سلولی این یون می تواند مسیرهای مرگ سلولی را فعال نموده و منتهی به ناهنجاری مختلفی از سطوح سلولی و مولکولی تا بروز رفتار گردد. در این پژوهش داروی هوشبر تیوپنتال سدیم از خانواده ی باربیتورات ها به صورت مزمن به نوزادان رت ویستار (از روز چهارم تا روز چهاردهم پس از تولد) تجویز و اثرات آن بر میزان بیان ژن های gad65 و gad67 که مسئول سنتز آنزیم تولید کننده ی گابا هستند، در قبل از بلوغ (در دو گامه نوزادی و جوانی) و بعد از بلوغ در هیپوکامپ این حیوانات اندازه گیری شد. میزان بیان رونوشت ژن های فوق در حیوانات تحت تیمار قبل از بلوغ در گامه نوزادی نسبت به گروه کنترل تفاوت معنی داری نشان نداد (p> 0.05)، در صورتی که نتایج در گروه جوانی نشان دهنده ی کاهش معنی دار بیان این ژن ها در مقایسه با گروه کنترل بود (p< 0.05). نتایج در دوره پس از بلوغ حاکی از افزایش در میزان بیان این ژن ها در گروه تیمار نسبت به گروه کنترل بود (p< 0.05). کاهش در بیان هر دو ژن gad65 و gad67 با توجه به پیش آگهی از اثرات توکسیک داروی تیوپنتال بر سلول های هدف می تواند این فرضیه را تقویت نماید که احتمالاً جمعیت یا عملکرد سلول های حاوی این رونوشت در گامه ی جوانی قبل از بلوغ در حیوانات تحت تیمار تاثیر منفی پذیرفته است و تصور می شود این اثرات، در دوره ی پس از بلوغ با مکانیسم های بازخوردی موجود در مغز روبرو شده و عدم تعادل در کنترل مکانیسم های بازخوردی منجر به افزایش بیان این ژن ها گردیده است.

بررسی وجود رونوشت لپتین و گیرنده آن در اووسیت حاصل از فولیکول آنترال گوسفند
پایان نامه وزارت علوم، تحقیقات و فناوری - دانشگاه فردوسی مشهد - دانشکده دامپزشکی 1393
  جلیل طاهری   عباس پرهام

در پستانداران،کارکردمناسب سیستم تولیدمثلی به توانایی بدن در دستیابی به ذخایر انرژی بستگی دارد. لپتین هورمونی است که توسط ژن obدرسلول های چربی تولید شده و در تنظیم دریافت غذا، مصرف انرژی و اعمال تولیدمثلی نقش دارد. شواهد متعددی وجود دارد که نشان می دهد لپتین اثر مستقیمی روی عملکرد اووسیت ها و تخمدان هادارد. بررسی حاضر باهدف تعیین بیان لپتین و گیرنده آن در اووسیت گوسفند با استفاده از روش رونوشت برداری معکوس و واکنش زنجیره ایپلیمراز (rt-pcr)، انجام پذیرفت. برای این منظور تخمدان گوسفندان کشتار شده جمع آوری گردید و کمپلکس اووسیت – کومولوس coc)) از فولیکول های آنترال آسپیره شد. پس از حذف سلول های کومولوس، rna اووسیت های لخت شده استخراج و به دنبال آن dna مکمل (cdna) سنتز گردید. dna مکمل به همراه پرایمرهای ویژه طراحی شده و جهت تکثیر قطعه مورد نظر در واکنش زنجیره ای پلیمراز مورد استفاده قرار گرفت. مشاهده محصولات واکنش زنجیره ای پلیمراز بر روی ژل الکتروفورزنشان دهنده تکثیر قطعات 162 و 121 جفت بازی به ترتیب مربوط به لپتین و گیرنده عملکردی لپتین در اووسیت گوسفند بود. بدین ترتیب وجود رونوشت لپتین و گیرنده آن در اووسیت گوسفند تائید شد. در این مطالعه، بتا اکتین ژن خانه دار انتخاب گردید و بافت چربی، به عنوان بافت کنترل مثبت مورد استفاده قرار گرفت. یافته اخیر بر تأثیر مستقیم لپتین در عملکرد اووسیت گوسفند دلالت دارد که باید در به عنوانپژوهش های بعدی بیشتر مورد بررسی قرار گیرد.

بررسی وجود رونوشت ژن لپتین و گیرنده آن در جسم زرد گوسفند
پایان نامه وزارت علوم، تحقیقات و فناوری - دانشگاه فردوسی مشهد - دانشکده دامپزشکی 1393
  مظفر کریم زاده کوشکقاضی   عباس پرهام

چکیده بررسی وجود رونوشت ژن لپتین و گیرند? آن در جسم زرد گوسفند به کوشش: مظفر کریم زاده لپتین، هورمون حاصل از ژن ob است که در تنظیم دریافت غذا ، متابولیسم انرژی و اعمال تولیدمثلی پستانداران دخیل است.لپتین بر سیستم تولید مثلی در سطوح مختلف محور هیپوتالاموس – هیپوفیز – گناد ، اثر دارد .لپتین حتی در محیط های لقاح آزمایشگاهی به عنوان یک ترکیب مکمل ، جهت بهبود باروری مطرح است. لذا این احتمال وجود دارد که کمبود لپتین و یا مقاومت به لپتین تا حدودی مسئول ناهنجاری های تولید مثلی محسوب شود. در مطالعه حاضر، وجود mrna لپتین و گیرنده آن با روش رونوشت برداری معکوس و واکنش زنجیره ای پلیمراز (rt-pcr) در جسم زرد گوسفند برای اولین بار نشان داده شد. در این مطالعه از تعداد 3 نمونه بافت جسم زرد بالغ فعال از تخمدان گوسفندان کشتار شده در کشتارگاه ، rna استخراج گردید و به دنبال آن cdna ساخته شد. با استفاده از cdna های به دست آمده و پرایمرهای اختصاصی طراحی شده ، واکنش زنجیره ای پلیمراز (pcr )انجام شد. الکتروفورز محصولات واکنش rt-pcr، نشانگر تکثیر قطعه 162 و 121 جفت بازی مربوط به cdna لپتین و گیرنده آن بود. ژن بتا اکتین به عنوان ژن خانه دار جهت تایید صحت استخراج rna و انجام واکنش pcr ، مورد استفاده قرار گرفت و در تمام نمونه های موردآزمایش ، قطعه 277 جفت بازی مربوط به آن مشاهده شد. بافت چربی به عنوان کنترل مثبت ، برای هر دو ژن مورد استفاده قرار گرفت . با توجه به تایید وجود رونوشت لپتین و گیرنده آن در جسم زرد گوسفند می توان بیان نمود که لپتین علاوه بر اثرات اولیه در سطح هیپوتالاموس- هیپوفیز، در مکانیسم های اتوکرینی و یا پاراکرینی فیزیولوژی تخمدان گوسفند و از جمله جسم زرد نیز دخیل