اتانول یک منبع سوخت تجدیدپذیر و ایمن می باشد که در دنیای کنونی تولید آن عمدتا بر پایه تخمیر میکروبی است. هدف این پژوهش جداسازی و شناسایی باکتری های تولید کننده اتانول و بهینه سازی شرایط رشد آنها می باشد و در نهایت جداسازی باکتری هایی با توانایی تولید بالای اتانول، به عنوان گزینه مناسب در صنعت می باشد. شرایط رشد سویه های جدا شده و تاثیر عواملی شامل درجه حرارت رشد، ph، زمان تخمیر، هوادهی، غلظت اولیه سوبسترا، منابع کربنی و نیتروژنی، بر تولید اتانول بررسی شد. باکتری های جداسازی شده از منابع طبیعی در محیط کشت مایع zsm غنی سازی شدند. در این پژوهش 32 باکتری تولید کننده اتانول جداسازی شد. باکتری های جداشده خالص سازی شدند و از نظر مورفولوژیکی و بیوشیمیایی بررسی شدند. در این تحقیق جداسازی باکتری ها از منابع طبیعی، و بهینه سازی شرایط رشد آن ها به منظور یافتن جدایه هایی با توان بالای تولید اتانول برای معرفی به صنعت، بوده است. در بررسی بهینه سازی منبع کربن 10 جدایه توانایی مصرف قند پنج کربنه زایلوز را داشتند. هنگام استفاده از منبع کربن زایلوز جدایه های zym5، zym3، zym6 و zym10 به ترتیب مقادیر 52/19، 01/11 و 00/15 و 00/12 گرم بر لیتر، اتانول تولید کردند. نتایج پژوهش حاضر نشان داد که باکتری های جداشده توانایی تولید اتانول را در هر دو شرایط هوازی و بی هوازی داشتند. بیشترین اتانول در هوادهی rpm150 و توسط zym7 به مقدار gl-1 90/7، تولید شد. در این مطالعه، بهترین دما برای رشد و تولید اتانول توسط باکتری های جداشده، °c 35-30 بود. بیشترین تولید اتانول توسط جدایه zym6 و در دمای °c 30، gl-128/6 اتانول سنجش شد. بنابراین شرایط بهینه برای تولید اتانول توسط جدایه ها شامل6 ph، دمای رشد °c 35، زمان تخمیر 24-48 ساعت و زایلوز و تریپتوفان به عنوان منبع مهم کربن و نیتروژن می باشد. شناسایی مولکولی ژن 16s rdna نشان داد که جدایه zym1، 95 درصد با استوباکتر پراکسیدانس و جدایه های zym2، zym3، zym5، zym6، zym7، zym8 و zym10 به ترتیب 99 درصد با استوباکتر اکیناونسیس، لاکتوباسیلوس پلنتاروم، ویسلا سایبریا، زایموموناس موبیلیس، لاکتوباسیلوس رامنوسوس و زایموموناس موبیلیس و جدایه های سویه های zym4 و zym9 به ترتیب دارای 98 درصد هومولوژی با استوباکتر فاباروم و استوباکتر پاستوریانوس همولوژی دارد.