نام پژوهشگر: مرجان قیامی حور
مرجان قیامی حور سعید مقصودی
یکی از اهداف مهم بیوتکنولوژی گیاهی تهیه مواد بیولوژیک ارزشمند از منابع گیاهی تحت شرایط in vitro می باشد. در این تحقیق غنای آنزیمی کالوس به دست آمده از ریشه گیاه آرنبیا اکروما نسبت به آنزیم های پراکسیداز و فنیل آلانین آمونیا لیاز مورد بررسی قرار گرفته است. جهت بررسی های آنزیمی کالوس سفید گیاه در محیط ls و کالوس قرمز گیاه در محیط وایت هر 21 روز واکشت می شدند. جهت بررسی آنزیم پراکسیداز پروتئین کالوس سفید در دو مرحله 45% و 80% رسوب داده شد و جهت بررسی آنزیم pal از دو مرحله رسوب دهی 45% و 75% کالوس قرمز استفاده گردید. جهت عیارسنجی فعالیت آنزیم pal از دو روش اسپکتروفتومتری کروماتوگرافی tcl استفاده شد که در روش اسپکتروفتومتری تولید محصول سینامیک اسید در اثر واکنش آنزیمی pal بر روی سوبسترافنیل آلانین پیگری شد ولی در این روش فعالیت آنزیمی مشاهده نگردید در روش کروماتوگرافی tcl نیز هدف پیگیری تولید سینامیک اسید بود که در این روش نیز به دلیل عدم فعالیت آنزیمی تولید سینامیک اسید مشاهده نشد. جهت بررسی فعالیت آنزیم پراکسیداز رسوب 80% کالوس سفید دارای فعالیت پراکسیدازی خوبی بود که جهت فرایند تخلیص انتخاب شد و دو مرحله تخلیص بر روی آن صورت گرفت. مرحه اول تخلیص کروماتوگرافی تعویض آنیونی به کمک ژل de-52 بود پروتئین ها از روی این ژل توسط محلول های کلرید سدیم با غلظت های 20،40،60،80،100،120و 150 شسته شدند. با استفاده از تست پراکسیداز بر روی تمام نمونه های جمع آوری شده از کروماتوگرافی و نیز ژل اکتروفورز نمونه ها تشخیص داده شد که نمونه 20 mm از میزان پروتئین و آنزیم پراکسیداز خوبی نسبت به سایر نمونه ها برخوردار است. این نمونه به کمک روش خشک کردن در انجماد به صورت جامد تغلیظ گردید. و در آخر پروتئین کل کالوس و پروتئین رسوبات 45% و 80% کالوس سفید به دو روش برادفورد و وزنی محاسبه شدند.