تهمینه برومند حقیقی سید محسن تقوی
شناسایی و پراکنش بیماری لکه قهوه ای قارچ خوراکی در استان فارس از زمستان 1389 تا پاییز 1390، شصت و پنج جدایه pseudomonas tolaasii از قارچ های خوراکی در استان فارس جداسازی گردید. کلیه جدایه ها از لحاظ خصوصیات فیزیولوژیکی، بیوشیمیایی، تغذیه ای، بیماری-زایی و اندازه ی قطعات dna تکثیر شده در حضور دو جفت آغازگر اختصاصی pt-1a/pt1d1 و ptof/ptor در واکنش زنجیره ای پلی مراز (pcr) و تعیین ترادف ژن 16s rrna مورد مقایسه قرار گرفتند. کلیه جدایه های مورد بررسی میله ای شکل، متحرک، گرم منفی، هوازی اجباری، اکسیداز مثبت، کاتالاز مثبت و از نظر واکنش فوق حساسیت روی توتون منفی بودند. بیشتر جدایه ها روی محیط کشت kb ، تولید رنگدانه فلورسنت نمی کردند. لیکن برخی جدایه ها روی محیط کشت kb قادر به ایجاد رنگدانه فلورسنت بودند. این جدایه ها روی محیط کشت kb ، پرگنه های سفید یا کرم روشن مایل به زرد با حاشیه شفاف تولید نمودند. کلیه جدایه ها فسفاتاز و اوره آز مثبت بوده، اما در مقابل آزمون های احیاء نیترات، رشد در ?c41، متیل رد، استوئین و هیدرولیز نشاسته منفی بودند. در آزمون های گروه lopat، نتیجه واکنش های اکسیداز، آرژنین دهیدرولاز مثبت بود اما نتیجه لوان و فوق حساسیت روی توتون، لهیدگی سیب زمینی منفی بود. در آزمون های گروه gatta جدایه های مورد بررسی در هیدرولیز ژلاتین دارای واکنش مثبت و در مقابل در آزمون های تیروزیناز، تارتارات و هیدرولیز آسکولین دارای واکنش منفی بودند. آنالیز عددی خصوصیات فنوتیپی، با استفاده از نرم افزار ntsys-pc نشان داد که جدایه های مورد بررسی در سطح 97% با یکدیگر تشابه دارند. در آزمون اثبات بیماری زایی کلیه جدایه ها صرفه نظرپرورش قارچ علائم بیماری را نشان دادند. با استفاده از جفت آغازگر اختصاصی pt1a/pt1d1 که بر اساس ژن تولاسین طراحی شده بود، استفاده شد، 60 جدایه از 65 جدایه یک قطعه dna به اندازه تقریبی 449 جفت باز تولید شد که صحت وجود ژن تولاسین را در این جدایه ها ثابت می کند . همچنین با جفت آغازگر اختصاصی ptof/ptor کلیه جدایه ها قطعه ی قابل انتظار 227 جفت بازی را تکثیر نمودند. در آزمون تعیین ترادف نوکلئوتیدی ژن 16s rrna با استفاده از آغازگرهای اختصاصی جنس سودوموناس و با استفاده از سوسپانسیون جوشانده شده باکتری بخشی از ژنوم باکتری تعیین شد. میزان شباهت نوکلئوتیدی بین جدایه های ایرانی با جدایه های غیر ایرانی در سطح 99-97 % بود. از جدایه 11b بیماری زا بودند و در مدت 24 ساعت در شرایط آزمایشگاه و سالن
