نام پژوهشگر: محمد باقر منتظر تربتی
مرضیه ایزدخواه محمد باقر منتظر تربتی
در این آزمایش تاثیر سطوح مختلف دانه ی زرشک بر پارامترهای خونی، عملکرد و سیستم ایمنی و آنتی اکسیدانی جوجه های گوشتی مورد بررسی قرار گرفت. تعداد 240 قطعه جوجه یک روزه گوشتی نر سویه تجاری راس 308 به 5 تیمار و 4 تکرار و تعداد 12 قطعه جوجه در هر تکرار با میانگین وزنی یکسان تقسیم شدند. تیمار ها شامل 5 سطح صفر، 1، 2، 3 و 4 درصد دانه ی زرشک بودند. داده های به دست آمده در قالب یک طرح کاملاً تصادفی مقایسه شدند. جوجه ها از سن 1 تا 10 روزگی با جیره دوره آغازین، 10 تا 28 روزگی با جیره دوره رشد و 28 تا 42 روزگی با جیره دوره پایانی تغذیه شدند. محاسبه میزان مصرف خوراک، افزایش وزن و ضریب تبدیل خوراکی صورت گرفت. در 42 روزگی از هر تکرار 2 عدد جوجه خونگیری و کشتار شدند که نمونه های خون جهت انجام آزمایشات سیستم آنتی اکسیدانی و ایمنی، تعیین غلظت گلوکز، کلسترول، تری گلیسرید، hdl، ldl، سدیم، پتاسیم و لاکتات دهیدروژناز جمع آوری و اندام های مختلف به طور جداگانه توزین شدند. دانه ی زرشک باعث کاهش معنی دار گلوکز سرم گردید (05/0> p). همچنین اثر دانه ی زرشک بر میزان کلسترول، hdl، سدیم و لاکتات دهیدروژناز سرم خون معنی دار بود. اثر دانه ی زرشک بر میزان تری گلیسرید،ldl و پتاسیم معنی دار نبود. دانه ی زرشک بر وزن کبد، قلب، پانکراس و چربی محوطه ی بطنی اثر معنی دار و نیز بر وزن طحال، بورس، ران، سینه، صفات عملکرد و بر تیتر آنتی بادی علیه نیوکاسل اثری نداشت. در این پژوهش دانه ی زرشک به طور معنی داری میزان فعالیت sod و gpx را افزایش داد (05/0> p). نتیجه اینکه استفاده از سطوح 1 و 2 درصد دانه ی زرشک در تعدیل برخی از پارامتر های خونی و صفات لاشه و تقویت سیستم ایمنی و آنتی اکسیدانی موثر بوده و بر عملکرد تاثیری ندارد.
آسیه خزاعی محمد باقر منتظر تربتی
این آزمایش به منظور بررسی تاثیر سطوح مختلف نوشیدنی کامبوچا بر عملکرد، وزن اجزای لاشه، فاکتورهای خونی و پاسخ ایمنی جوجه های گوشتی انجام شد و از 200 قطعه جوجه گوشتی یکروزه نژاد راس در قالب 5 تیمار با 4 تکرار و 10 قطعه جوجه در هر تکرار با میانگین وزن یکسان استفاده شد. تیمارها شامل 5 سطح 0%، 10%، 20%، 30% و 40% عصاره کامبوچا بود. آزمایش در قالب طرح کاملا تصادفی طراحی شده بود. جیره ی مورد استفاده شامل استارتر از 1 تا 14 روزگی، رشد از 14 تا 28 روزگی و جیره پایانی از 28 تا 42 روزگی بود و مصرف خوراک، افزایش وزن بدن و ضریب تبدیل غذایی تخمین زده شد. در پایان دوره آزمایش 2 جوجه از هر تکرار انتخاب و از طریق قطع ورید گردن خونگیری شد و میزان برخی فاکتورهای سیستم ایمنی و فاکتورهای خونی از قبیل گلوکز، کلسترول، تری گلیسرید، hdl، ldl، اوره، اسید اوریک، کراتینین، bun و آنزیم های کبدی اندازه گیری شد. تجزیه و تحلیل داده ها با نرم افزار sas انجام شد. نتایج نشان داد عصاره کامبوچا سبب کاهش معنی-داری در غلظت تری گلیسرید، اوره، اسید اوریک، bun و بازده لاشه شد اما بر غلظت آنزیم های آنتی اکسیدانی، آنزیم های کبدی، گلوکز، کلسترول، کراتینین، ldl، hdl، خصوصیات لاشه به لحاظ آماری تاثیری نداشت. به نظر می رسد استفاده از سطح 10% عصاره کامبوچا در آب می تواند در بهبود بازده لاشه و برخی پارامترهای خونی مفید واقع شود.
ایدا اسدی محمد باقر منتظر تربتی
چکیده پژوهش در همه پستانداران استروژن مهم ترین هورمون تنظیم کننده فرآیند تولید مثل است. پارامترهای مختلف تحت تاثیر استروژن صورت می گیرد. استروژن با تاثیر بر سلولهای پستانی و افزایش گیرنده های رشد و پرولاکتین در این سلول ها به طور غیر مستقیم بر لاکتوژنز تاثیر دارد. بیوسنتز استروژن در بافتهای مختلف بستگی به بیان ژن کدکننده آروماتاز یعنیcyp19دارد. در این پژوهش به منظور بررسی چندشکلی ژن cyp19از نمونه های خون مربوط به120 راس گوسفند بلوچی و 120 راس گوسفند کردی dnaاستخراج شد. چند شکلی فضایی تک رشته ای (sccp) ناحیه تکثیر شده از اگزون 3 ژن آروماتاز با استفاده از ژل اکریل آمید غیردناتوره و رنگ آمیزی نیترات نقره بدست آمد. فراوانی های آلل های a، b و c در نژاد بلوچی به ترتیب28/0 ، 19/0 و 53/0 و در نژاد کردی 26/0 ، 22/0 و 52/0 بود. هیچ یک از دو جمعیت در تعادل هاردی- وینبرگ قرار نداشت. شاخص شانون و تعداد آلل موثر در جمعیت گوسفندان بلوچی به ترتیب 02/1 و 54/2 و در جمعیت گوسفندان کردی 02/1 و61/2 برآورد شد. هم چنین در مطالعه حاضر ارتباط معنادار آماری بین ژنوتیپ های این ژن با وزن تولد و صفات رشد در گوسفندان بلوچی و کردی یافت نشد. نتایج تعیین توالی نمونه ها وجود جهش a266t(aj012153) را در ژنوتیپ های aaو ccنژاد بلوچی و در نژاد کردی aaنشان داد. وجود جهش از نوع افزایش نوکلئوتید ctcرا در نمونه مربوط به الگوی aaنژاد کردی در موقعیت بین نوکلئوتیدهای 261 و 260 ژن نشان داد. واژگان کلیدی: چندشکلی، استروژن، آنزیم آروماتاز، pcr-sscp
حمیدرضا ظاهرفریمانی محمد باقر منتظر تربتی
به منظور بررس? چند شکل? ژن prnp (پریون پروتئین) و ارتباط آنها با وزن تولد و افزایش وزن روزانه، از تعداد 248 رأس گوسفند نر و ماده ی بلوچی و کردی به طور تصادف? خونگ?ری شد. استخراج dna از خون تام به کمک روش بهینه یافته نمکی انجام گرفت. جهت تکثیر قطعه 762 جفت بازی از ژن prnp واکنش زنجیره پلی مراز (pcr) انجام گرفت. چند شکلی فضایی تک رشته ای (sccp) محصولات rcr با استفاده از ژل اکریل آمید و رنگ آمیزی نیترات نقره بدست آمد. برای این ژن در نمونه مورد مطالعه 3 الگوی باندی aa، ab وbc مشاهده شد. فراوانی های ژنی برای آلل هایa ، b و c به ترتیب در نژادهای بلوچی 79/0، 2500/0 و 0242/0و در نژاد کردی 6276/0، 3571/0 و 0153/0 بود. ارتباط ب?ن ژنوتیپ ها با وزن تولد و صفات رشد به وس?له نسخه 1/9 نرم افزار sas تجزیه تحلیل گردید. نتایج نشان داد که چندشکلی ژن prnp اثر معناداری بر روی برخی صفات مرتبط با رشد دارد (p ? 0/05 ). کلمات کل?دی: pcr- sscp ، prnp ، وزن تولد و افزایش وزن روزانه ، گوسفند بلوچی و کردی
عباس شیبک محمد باقر منتظر تربتی
لپتین (lep) اساساً توسط بافت چربی تولید می شود و نقش حیاتی در تنظیم وزن بدن از طریق کاهش مصرف خوراک و تحریک هزینه انرژی ایفا می کند. فعالیّت فیزولوژیکی هورمون لپتین از طریق گیرنده لپتین (lepr) اعمال می شود. لپتین در بسیاری از اعمال فیزیولوژیکی بدن مانند رشد جنین، پاسخ های ایمنی یا پیش التهابی، بسیاری از واکنش های محور هیپوتالاموس- هیپوفیز- آدرنال و هیپوتالاموس- هیپوفیز- گنادها، جذب مواد مغذی در روده، اکسیداسیون سوخت های متابولیکی، ترموژنز، لیپوژنز، آنژیوژنر، باروری و تنظیم مصرف غذا دخالت دارد. علاوه بر این نشان داده شده است که لپتین با صفات تولیدی دارای رابطه معنی داری است. هدف از این مطالعه بررسی چندشکلی ژن های لپتین و گیرنده لپتین و ارتباط آن با صفات رشد در گوسفند کردی بود. نمونه های خونی از 120 راس گوسفندان کردی گردآوری و استخراج dna بوسیله روش استخراج بهینه یافته نمکی انجام شد. قطعه های 275 جفت بازی از اگزون 3 و 269 جفت بازی از اگزون 2 با دو جفت پرایمر اختصاصی به ترتیب برای ژن lep و lepr تکثیر شد. sscp محصولات pcr بوسیله ژل آکریل آمید و رنگ آمیزی نیترات نقره بدست آمد. برای هر دو ژن lep و lepr 3 ژنوتیپ مشاهده شد که در ژن lep فراوانی آن ها به ترتیب برابر با (aa) 3/0،(ab) 275/0،(ab) 425/0 و برای ژن lepr برابر با (aa) 21/0،(ab) 24/0،(ac) 55/0 برآورد گردید. فراوانی های ژنی برای آلل های a، b و c به ترتیب در ژن lep برابر با 4370/، 350/ و 213/0 بود و در ژن lepr برابر با 6050/، 120/ و 2750/ بود. ارتباط چندشکلی های این دو ژن با صفات رشد بوسیله رویه ی glm نرم افزار sas version 9 آنالیز شد و نتایج نشان داد که هیچ یک از چند شکلی های مشاهده شده در ناحیه مورد مطالعه از ژن lep ارتباط معناداری با صفات رشد نداشت اما چندشکلی های مشاهده شده در سطح ژن lepr با وزن از شیرگیری (033/0< p) و افزایش وزن روزانه از تولّد تا سن از شیرگیری (017/0< p) ارتباط معنادار آماری داشت.
محمد محمودزاده محمد باقر منتظر تربتی
صفات تولید شیر، صفات اقتصادی مهم در صنعت گاو شیری هستند که به عنوان صفات کمی که تحت تأثیر محیط و ژن های زیادی قرار دارند، در نظر گرفته می شود. ژنتیک مولکولی می تواند با روش-های سنتی انتخاب مصنوعی روی فنوتیپ، با بکار گیری انتخاب به کمک نشانگر (mas)، به منظور توسعه سیستم های کارآمدتر انتخاب، توأم شود. ژن های خاصی به عنوان کاندیداهای بالقوه در ارتباط با صفات عملکردی شیر ارائه شده اند، در میان آن ها به نظر می رسد که ژن لاکتوژن جفتی گاوی به دلیل نقش حیاتی آن در توسعه پستان به هنگام آبستنی و شیردهی بعد از زایش، امیدوار کننده باشد. محصول ژن tlr9 برای انتقال لکوسایت ها به محل عفونت ضروری است، که آن می تواند عاملی موثر برای کنترل میزان سلول های بدنی در شیر باشد. هدف از این مطالعه بررسی چندشکلی ژنتیکی ژن-های لاکتوژن جفتی گاوی و tlr9 و ارتباط آن ها با صفات تولید شیر و نمره سلول های بدنی در گاوهای شیری استان خراسان رضوی بود. نمونه های خونی از 150 رأس گاو شیری هلشتاین متعلق به 6 گله جمع آوری شدند و dna به روش بهینه یافته نمکی- کلروفورم استخراج شد. قطعه های مورد نظر 449 جفت بازی از اینترون یک ژن لاکتوژن جفتی و 245 جفت بازی دربرگیرنده اینترون یک ژنtlr9 بوسیله واکنش زنجیره ای پلی مراز(pcr) تکثیرشدند. قطعه ژن لاکتوژن جفتی و tlr9 بوسیله چند شکلی فضایی تک رشته ای به منظور بدست آوردن الگوهایdna تک رشته جدا شده بوسیله الکتروفورز ژل پلی آکریل آمید تجزیه و تحلیل و با استفاده از رنگ آمیزی نیترات نقره مشاهده شدند. برای ژن لاکتوژن جفتی شش ژنوتیپ با فراوانی های 30/28 (aa)، 49/8 (ab)، 24/29 (ac)، 89/1 (cc)، 24/29(ad) و 83/2(dd) مشخص شد. فراوانی آللی برای a، b، c و d بترتیب برابر با6179/0، 0425/0، 1651/0 و 1745/0 بود. برای ژن tlr9 نه ژنوتیپ aa ، ab، ac، ad، bb، bc، bd، cc و cd بترتیب با فراوانی 15/8، 81/14، 66/26، 04/17، 88/8، 48/1، 92/5، 96/2 و 07/14 بدست آمد. فراوانی آللی بترتیب برای a، b، c و d ، 41/37، 000/2، 07/24 و 52/18 بود. ارتباط چندشکلی و صفات مطالعه شده بوسیله رویه ی mixed نرم افزار sas 9.1 ارزیابی شد. نتایج نشان داد که ارتباط چند شکلی ژن لاکتوژن جفتی با درصد چربی معنی دار است (012/0> p) و چند شکلی ژن tlr9 ارتباط معنی داری با نمره سلول های بدنی ندارد (0955/0<p).
مونا گل شیخی محمد باقر منتظر تربتی
صفات تولید شیر، صفات اقتصادی مهم در صنعت گاو شیری هستند که به عنوان صفات کمی که تحت تأثیر محیط و ژن های زیادی قرار دارند، در نظر گرفته می شود. ژنتیک مولکولی می تواند با روش-های سنتی انتخاب مصنوعی روی فنوتیپ، با بکارگیری انتخاب به کمک نشانگر (mas)، به منظور توسعه سیستم های کارآمدتر انتخاب، توأم شود. ژن های خاصی به عنوان کاندیداهای بالقوه در ارتباط با صفات عملکردی شیر ارائه شده اند، در میان آن ها به نظر می رسد که ژن گیرنده پرولاکتین (prlr) به دلیل نقش حیاتی آن در انتقال سیگنال از هورمون های لاکتوژنیک به پروموتورهای ژن پروتئین شیر، امیدوار کننده باشد. محصول ژن cd18 برای انتقال لکوسایت ها به محل عفونت ضروری است، که آن می تواند کاندیدای نوید بخشی برای کنترل میزان سلول های بدنی در شیر باشد. هدف از این مطالعه بررسی چندشکلی ژنتیکی ژن های گیرنده پرولاکتین و cd18 و ارتباط آن ها با صفات تولید شیر و نمره سلول های بدنی در گاوهای شیری استان خراسان رضوی بود. نمونه های خونی از 150 رأس گاو شیری هلشتاین متعلق به 6 گله جمع آوری شدند و dna به روش بهینه یافته نمکی- کلروفورم استخراج شد. قطعه های مورد نظر 357 جفت بازی از اگزون هفت ژن گیرنده پرولاکتین و 638 جفت بازی دربرگیرنده اگزون پنج ژنcd18 بوسیله واکنش زنجیره ای پلی مراز(pcr) تکثیرشدند. قطعه ژن گیرنده پرولاکتین بوسیله چند شکلی فضایی تک رشته ای به منظور بدست آوردن الگوهایdna تک رشته جدا شده بوسیله الکتروفورز ژل پلی آکریل آمید تجزیه و تحلیل و با استفاده از رنگ آمیزی نیترات نقره مشاهده شدند. pcr-rflpبه منظور تعیین جهش نقطه ای در ژن cd18 با استفاده از هضم محصولات تکثیری با آنزیم برشی اندونوکلئاز taqiانجام شد. محصولات هضم در الکتروفورز ژل آگارز یک درصد و تحت رنگ آمیزی اتیدیوم برماید قرار گرفتند. برای ژن گیرنده پرولاکتین سه ژنوتیپ با فراوانی های 368 /0(aa) ، 356/0(ac) و276/0(ab) مشخص شد. فراوانی آللی برای a، b و c بترتیب برابر با 686/0، 136/0و 178/0 بود. برای ژن cd18 دو ژنوتیپ aa و ab بترتیب با فراوانی 694/0 و 306/0 پیدا شد. فراوانی آللی بترتیب برای a و b 847/0 و 153/0بود. ارتباط چندشکلی و صفات مطالعه شده بوسیله رویه ی مختلط نرم افزار sas 9.1 ارزیابی شد. نتایج نشان داد که چند شکلی ژن گیرنده پرولاکتین با تولید شیر بطور معناداری مرتبط است p<0/0266)) و چند شکلی ژن -cd18 بطور معناداری با نمره سلول های بدنی ارتباط دارد (p<0/0251). در مورد صفات تولید شیر و نمره سلول های بدنی بترتیب ژنوتیپ های ac و aa دارای بهترین عملکرد بودند.
زکیه آزادوار همایون فرهنگ فر
هدف از این تحقیق، برآورد روندهای فنوتیپی و ژنتیکی برای رکوردهای شیر 305 روز (شیر تصحیح شده) و کل دوره شیردهی (شیر تصحیح نشده) در گاوهای شکم اول هلشتاین ایران بود. داده های مورد استفاده در این پژوهش شامل 332160 رکورد متعلق به 332160 رأس گاو هلشتاین شکم اول بود که طی سال های 1389- 1369 در 2318 گله زایش داشتند. نرم افزار مورد استفاده برای آنالیز ژنتیکی صفات dmu بود. برآورد اجزاء واریانس و پیش بینی ارزش اصلاحی به ترتیب با روش حداکثر درست-نمایی محدود شده و بهترین پیش بینی نااریب خطی انجام شد. روند های فنوتیپی برای صفات مزبور به ترتیب 47/125 و 179 کیلوگرم در سال بود که به لحاظ آماری معنی دار بودند. روندهای ژنتیکی برای صفات فوق به ترتیب 5/18 و 18/22 کیلوگرم در سال بر آورد شدند که با یکدیگر اختلاف معنی دار آماری نداشتند. وراثت پذیری صفات به ترتیب 23/0 و 25/0 بدست آمد که با یکدیگر تفاوت معنی دار آماری داشتند. همچنین نتایج این پژوهش نشان داد ارزیابی گاوها برای صفت شیر تصحیح نشده (با کمک ضرایب) و شیر تصحیح شده 305 روز از نقطه نظر تغییرات ژنتیکی در جمعیت، کم و بیش با یکدیگر مشابه می باشند. برای گاوهای نر، همبستگی بین ارزش اصلاحی در دو روش ارزیابی ژنتیکی، با بالا رفتن تعداد دختران آنها، افزایش قابل ملاحظه ای را نشان داد. برای پیش بینی ارزش اصلاحی گاوهای هلشتاین ایران توصیه می شود آنالیز ژنتیکی رکوردهای خام شیر (تصحیح نشده برای طول دوره شیردهی) به وسیله یک مدل حیوانی اجرا گردد که در آن، طول دوره شیردهی به عنوان متغیر کمکی گنجانده شده است.
نرگس ریاحی نیا محمد باقر منتظر تربتی
با توجه به تجویز روزانه مقادیر زیادی از دارو ها توسط پزشکان، در سال های اخیر توجه زیادی به اثر گیاهان در درمان و پیشگیری مسمومیت ناشی از داروها معطوف شده است. مسمومیت با استامینوفن یکی از علل مهم آسیب های کبدی است. در تحقیق حاضر اثر محافظتی عصاره هیدروالکلی گلبرگ زعفران در مسمومیت کبدی حاد ناشی از استامینوفن مورد بررسی قرار گرفته است. در این مطالعه 36 سر موش صحرایی نر نژاد ویستار در شش گروه شش تایی توزیع گردیدند. به گروه یک به عنوان شاهد سالم، سرم فیزیولوژی و به گروه دو به عنوان شاهد مسموم، استامینوفن (600 میلی گرم/کیلوگرم) تجویز شد. به گروه های سه و چهار به ترتیب عصاره گلبرگ زعفران با دز های 10 و 20 میلی-گرم/کیلوگرم و به گروه های پنج و شش عصاره گلبرگ زعفران (به ترتیب 10و 20 میلی گرم/کیلوگرم) همراه با استامینوفن (600 میلی گرم/کیلوگرم) تجویز گردید. در پایان دوره برای سنجش پارامتر های بیوشیمیایی و هپاتولوژیک خونگیری از قلب انجام شد و پس از آن جهت بررسی های هیستوپاتولوژیک، کبد حیوانات در فرمالین 10درصد قرار داده شد. تیمار استامینوفن سبب افزایش سطح سرمی آلانین-آمینوترانسفراز و آسپارتات آمینوترانسفراز در موش ها گردید. عصاره گلبرگ زعفران با دز 20 میلی-گرم/کیلوگرم باعث کاهش در میزان آنزیم های ast و alt، هموگلوبین، هماتوکریت و تعداد گلبول-های قرمز گردید. اما تعداد گلبول های سفید در این دز عصاره افزایش یافت. در بررسی آسیب شناسی، عصاره هیدروالکلی گلبرگ زعفران با دز 20 میلی گرم/کیلوگرم، آسیب کبدی ناشی از استامینوفن را مانع شد. تغییرات بافتی با یافته های بیوشیمیایی هماهنگ بود. با توجه به نتایج تحقیق حاضر، عصاره هیدروالکلی گلبرگ زعفران با دز 20 میلی گرم/کیلوگرم در پیشگیری از مسمومیت حاد کبدی موثر است.
حامد شریفی نژاد محمد باقر منتظر تربتی
گرلین یک هورمون پپتیدی متشکل از 26 اسیدآمینه در طیور است. که با تحریک آزاد سازی هورمون رشد، مصرف غذا و افزایش وزن بدن موجب توازن مثبت انرژی و نیز چاقی می¬شود. هدف از انجام این تحقیق، تعیین چندشکلی ژن گرلین و بررسی ارتباط آن با صفات رشد در جوجه¬های گوشتی سویه راس و کاب می-باشد. بدین منظور از تعداد 100 قطعه جوجه گوشتی سویه راس و 60 قطعه جوجه گوشتی سویه کاب نمونه خون تهیه و استخراج dna به وسیله روش نمکی بهینه یافته صورت گرفت. پس از استخراج dna، قطعه¬ای به اندازه bp423 از ناحیه اگزون یک تا اگزون دو ژن گرلین با استفاده از تکنیک pcr تکثیر گردید. جهت تعیین ژنوتیپ نمونه¬ها، از روش آرایش فرم فضایی رشته¬های منفرد و الکتروفورز محصولات تک رشته¬ای بر روی ژل آکریل آمید و رنگ آمیزی نیترات نقره استفاده گردید. برای ژن گرلین در جوجه¬های گوشتی سویه راس سه الگو بنام a، b، c و در جمعیت جوجه¬های گوشتی سویه کاب نیز سه الگو که با d، e و f نامگذاری شدند مشاهده شد. ارتباط چندشکلی¬ این ژن با صفات رشد بوسیله رویه¬ی glm نرم افزار sas آنالیز شد و نتایج نشان داد که هیچ یک از الگوهای مشاهده شده در ناحیه مورد مطالعه از ژن گرلین، در هیچ کدام از دو جمعیت¬ ارتباط معنی داری با صفات رشد نداشته است رلین یک هورمون پپتیدی متشکل از 26 اسیدآمینه در طیور است. که با تحریک آزاد سازی هورمون رشد، مصرف غذا و افزایش وزن بدن موجب توازن مثبت انرژی و نیز چاقی می¬شود. هدف از انجام این تحقیق، تعیین چندشکلی ژن گرلین و بررسی ارتباط آن با صفات رشد در جوجه¬های گوشتی سویه راس و کاب می-باشد. بدین منظور از تعداد 100 قطعه جوجه گوشتی سویه راس و 60 قطعه جوجه گوشتی سویه کاب نمونه خون تهیه و استخراج dna به وسیله روش نمکی بهینه یافته صورت گرفت. پس از استخراج dna، قطعه¬ای به اندازه bp423 از ناحیه اگزون یک تا اگزون دو ژن گرلین با استفاده از تکنیک pcr تکثیر گردید. جهت تعیین ژنوتیپ نمونه¬ها، از روش آرایش فرم فضایی رشته¬های منفرد و الکتروفورز محصولات تک رشته¬ای بر روی ژل آکریل آمید و رنگ آمیزی نیترات نقره استفاده گردید.