قارچ ها جهت غلبه بر سیستم دفاعی گیاه از ابزار مختلفی بهره می گیرند. ترکیبات فیتوآنتی سیپین از جمله مواد دفاعی است که در گیاه جهت جلوگیری از حمله پاتوژن ها تولید می شود. آنزیم توماتیناز، که یک آنزیم گلیکوزیل هیدرولازی است، جهت تجزیه فیتوآنتی سیپین و غلبه بر سیستم دفاعی گیاه توسط طیفی از قارچ ها از جمله تعدادی از فرم های اختصاصی قارچ fusarium oxysporum تولید می شود. با توجه به جایگاه خربزه در کشاورزی استان خراسان و اهمیت بیماری زردی و پژمردگی آوندی خربزه در این مطالعه حضور ژن توماتیناز در جدایه های مربوط به نژاد 1و 1.2 قارچ f. oxysporum f. sp. melonis با هدف تکثیر، همسانه سازی توالی ژنومی و ساخت سازه بیانی آن انجام شد. بدین منظور آغازگرهای اختصاصی psh30-f/r بر اساس توالی ژن توماتیناز در فرم اختصاصی f. oxysporum f. sp. lycopersici طراحی شد. نتایج الگوی الکتروفورزی محصول واکنش زنجیره ای پلی مراز جدایه ها، اختصاصی بودن آغازگرهای طراحی شده و وجود ژن توماتیناز در قارچ fom را تأیید نمود. قطعه تکثیر یافته جهت مطالعات تکمیلی در ناقل ptg19-t همسانه سازی گردید. نتایج توالی یابی دو جهته سازه ساخته شده، وجود چندین جهش را در توالی توماتیناز fom نشان داد. به منظور ساخت سازه بیانی توماتیناز fom ، آغازگرهای اختصاصی توماتیناز با نام psh30.3-f/r براساس جایگاه برشی spe1 و sac1 طراحی شد. انجام واکنش زنجیره ای پلی مراز با استفاده از این آغازگرها قطعه ای با تعداد 1056 جفت باز را تکثیر کرد که این قطعه جایگاه های برشی مورد نظر را دارد. به منظور بیان پروتئین، قطعه توماتیناز تکثیر یافته به ناقل pet21 متصل شده و به سویه bl21 انتقال یافت . سازه ساخته شده با نام petfom به صورت دو جهته توالی یابی گردید. نتایج توالی یابی نشان داد که سازه ساخته شده در جهت صحیح قرار گرفته و فاقد کدون پایان است. بعد از تأیید سازه، بیان توماتیناز در سطح پروتئینی بررسی گردید. نتایج به دست آمده نشان داد که بیان پروتئینی توماتیناز نیازمند تغییر عوامل دیگری از قبیل تغییر سویه باکتری میزبان، اعمال تغییرات دمایی پایین تر و یا غلظت های دیگری از iptg است. به منظور بررسی بیان توماتیناز در سطح رونویسی واکنش rt-pcr با استفاده از آغازگرهای اختصاصی توماتیناز انجام شد و نتایج آن نشان داد که توماتیناز در سطح رونویسی بیان شده است.