نام پژوهشگر: آذر شاهمرادی

جداسازی راه انداز زیر واحد با وزن مولکولی پائین گلوتنین گندم و آزمون بیان آن با استفاده از روش تفنگ ژنی
پایان نامه وزارت علوم، تحقیقات و فناوری - دانشگاه تبریز - دانشکده کشاورزی 1391
  آذر شاهمرادی   بهرام باغبان کهنه روز

راه اندازهای ژنی از عوامل ضروری و اصلی در بیان عمومی و اختصاصی ژن ها محسوب می شوند. یکی از مسائل مرتبط با تراریخته سازی غلات جهت تغییر ترکیب پروتئین آندوسپرم و بیان ژن های هترولوگ در آن، دسترسی به راه انداز های قوی و اختصاصی آندوسپرم است. راه انداز زیر واحد با وزن مولکولی پائین گلوتنین گندم به دلیل بیان اختصاصی در آندوسپرم و غنی بودن ذخیره محصول آن در بذر گندم (70 -60 درصد از گلوتنین) که نمایانگر قدرت بالای آن می باشد، انتخاب گردید. در راستای این هدف، dna کل گندم در مرحله دو برگچه ای با استفاده از روش ctab استخراج شد. ناحیه راه انداز توسط pcr و با استفاده از آغازگر های اختصاصی طراحی شده بر اساس بانک اطلاعات نوکلئوتیدی ncbi تکثیر شد. قطعه هدف پس از اتصال به حامل همسانه سازی pgem-t جهت تراریخته سازی سلول های مستعد باکتریایی به کار گرفته شد. کلنی های سفید که حضور قطعه درجی در آن ها با کلنی pcr تائید شده بود برای کشت مایع و استخراج پلاسمید انتخاب شدند. حضور قطعه درجی از طریق برش آنزیمی با اطمینان بیشتری مورد تائید قرار گرفت و پلاسمید ها به منظور توالی-یابی به شرکت bioneer کره جنوبی ارسال شدند. بررسی بیوانفورماتیکی نتایج توالی یابی حاکی از جداسازی موفق راه انداز lmw-gs بود. راه انداز مذکور جهت بررسی فعالیت کارکردی آن در آندوسپرم، در حامل بیانی pcambia3301 درج شد. این حامل با استفاده از تفنگ ژنی به آندوسپرم بذور نارس گندم شلیک گشت. بیان موفق ژن تحت کنترل راه انداز جداسازی شده، در سلول های دریافت کننده سازه ژنی به صورت لکه های آبی رنگ نمودار گردید. این راه انداز می تواند به عنوان ابزار بیان اختصاصی در فرآیند تراریخته سازی گندم و احتمالا دیگر غلات مورد استفاده قرار گیرد