ارائه یک روش سریع، تکرارپذیر و حساس کروماتوگرافی مایع با کارایی بالا (hplc) برای سنجش نیستاتین در فرمولاسیون دارویی و مقایسه با روش سنجش میکروبی (bio assay) به عنوان روش مرجع که در usp عنوان گردیده است در دستور کار این تحقیق قرار گرفته است. بهینه سازی این روش با تغییر پارامتر هایی مانند سرعت جریان، ph ، دما، غلظت بافر استات آمونیوم و نسبت فاز آلی/آبی انجام شد. جهت بررسی دقت و کارایی روش مورد نظر از تکنیک طراحی آزمایش استفاده گردید و نتایج بدست آمده از مطالعه تئوری با نتایج آزمایش، کاملاً مطابقت داشت. آنالیز نیستاتین توسط فاز معکوس (rp) با ستون c18 و دتکتور uv انجام گردیده است. فاز متحرک مورد استفاده آمونیوم استات 0.05m به عنوان بافر و و متانل با نسبت (70/30 v/v) می باشد. روش ازلحاظ خطی بودن پاسخ، تکرارپذیری، صحت، حد تشخیص و حد کمی مورد معتبرسازی قرار گرفته است. روش پیشنهادی سریع، تکرار پذیر، گزینش پذیر و دارای صحت، دقت، حساسیت بالا می باشد.