نام پژوهشگر: iهاجر انصاری

کلونینیگ، خالص سازی و ارزیابی کینتیک آنزیم نوترکیب فنیل آلانین آمونیوم لیاز (pal)
پایان نامه وزارت علوم، تحقیقات و فناوری - دانشگاه شهید چمران اهواز - دانشکده دامپزشکی 1391
  iهاجر انصاری   محمود هاشمی تبار

فنیل آلانین آمونیوم لیاز (pal) اولین آنزیم ضروری در بیوسنتز فنیل پروپانوئیدها در تعداد زیادی از گیاهان بالاتر می باشد؛ و در پستانداران بیان نمی شود. در دو دهه گذشته، pal به عنوان دارو برای درمان فنیل کتونوری و لوکمی در حیوانات و انسان استفاده شده است. کلون سازی pal نوترکیب از منابع مختلف برای دست یابی به محصولات درمانی موثر در سال های اخیر انجام شده است. در این مطالعه، بخش کاتالیتیک pal نیشکر با فراوانی بالا در استان خوزستان، در اشریشیا کلای با استفاده از وکتور pet28a(+) کلون گردید و خصوصیات فیزیکوشیمیایی و کینتیکی آن مانند km، vmax، دما و ph بهینه تعیین گردید. نتایح این مطالعه نشان داد که طول توالی کاتالیتیک آنزیم نوترکیب bp 798 بود که پروتئینی با طول 267 اسید آمینه را کد نمود. دما و ph بهینه pal کلون شده به ترتیب 40 درجه سانتی گراد و 7 بود. مقادیر km و vmax، pal بیان شده در اشریشیا کلای به ترتیب 125 میلی مولار و 250 میکرومول در هر میلی لیتر در هر دقیقه بدست آمد. آنالیز فیلوژنی بین آنزیم های pal نیشکر و ذرت وحشی نشان داد، pal نوترکیب خصوصیات بیوشیمیایی و کینیتیکی مشابهی با pal گزارش شده در گیاهان دیگر داشت. نتایج ما نشان داد که pal نیشکر یک ژن تکاملی حفظ شده است و کمک می کند تا یک pal نوترکیب برای تحقیقات آینده مانند فعالیت آمونیوم لیاز در کشت سلول و حیوانات آزمایشگاهی و آماده سازی یک محصول درمانی برای جلوگیری از رشد سلول های سرطانی فراهم شود.