نام پژوهشگر: سعیده آقایی

بیان ژن گلایفوسیت اکسیدو ردوکتاز در میزبان پروکاریوتی (e. coli) و بررسی تجزیه گلایفوسیت در آن
پایان نامه وزارت علوم، تحقیقات و فناوری - دانشگاه زنجان - دانشکده کشاورزی زنجان 1391
  سعیده آقایی   امیر موسوی

گلایفوسیت[n-(phosphonomethyl) glycine] علف کشی غیر انتخابی است که بیشتر از 30 سال در مدیریت علف های هرز مورد استفاده قرار گرفته است. گلایفوسیت از فعالیت آنزیم epsps (5-enolpyruvylshikimate-3-phosphate synthase) که آنزیمی کلیدی در بیوسنتز اسیدهای آمینه حلقوی است ممانعت می کند. توالی بهینه شده ژن تجزیه کننده گلایفوسیت به نام گلایفوسیت اکسید ردوکتاز به صورت مصنوعی ساخته شده است و در تحقیق حاضر برای مطالعه فعالیت آنزیمی این ژن در حامل بیانی pet28a همسانه سازی گردید. در این تحقیق ابتدا پرایمرهای اختصاصی طراحی و با استفاده از تکنیک pcr قطعه مد نظر تکثیر شده و پس از استخراج قطعه از ژل محصول واکنش اتصال به باکتری e.coli سویه dh5? انتقال داده شد و پس از استخراج پلاسمید از باکتری های تراریخت، حضور قطعه مورد نظر در پلاسمیدها به وسیله هضم آنزیمی تأیید شد و پلاسمیدهای نوترکیب توالی یابی شدند. سپس بیان ژن مذکور در میزبان پروکاریوتی باکتری bl21 e. coli بهینه شد و با روش sds page مورد تایید قرار گرفت. نتایج نشان داد که بهترین شرایط برای بیان ژن مد نظر در سیستم pet، در حضورiptg یک میلی مولار، 6/0=od600، دمای 37 درجه سانتیگراد و 4 ساعت پس از انجام عمل القا، می باشد. به منظور بررسی فعالیت زیستی، باکتری های نوترکیب دارای synth-gox در محیط حداقل فاقد فسفات حاوی غلظت های مختلف گلایفوست کشت داده شدند. نتایج این تست نشان داد که باکتری طبیعی تا غلظت 5/0 میلی مولار گلایفوسیت توان زنده ماندن در محیط حداقل را دارد در صورتی که باکتری های حاوی ژن synth-goxتا غلظت 1 میلی مولار توان زیستن در این محیط را نشان دادند.