هدف از این مطالعه ارزیابی میزان شیوع و مقاومت آنتی بیوتیکی سویه های استافیلوکوکوس کواگولاز منفی جدا شده از نمونه های شیر مخازن تعدادی از گاوداریهای صنعتی مشهد، در طی سال های 1389 و 1390 در مشهد و بررسی میزان فراوانی ژن های کدکننده انتروتوکسین های استافیلوکوکوسی sea، seb، sec، sed و see در این سویه ها بود. استافیلوکوکوس های کواگولاز منفی بر اساس روش های آزمایشگاهی متداول، در 37 نمونه (37%) از 100 نمونه شیر خام با غلظت متوسط cfu/ml 105 × 14/1 مشاهده شد. در مجموع 44 جدایه استافیلوکوکوس کواگولاز منفی شامل 14 سویه استافیلوکوکوس کروموژنز (8/31%)، 12 سویه استافیلوکوکوس هایکوس (2/27%)، 10 سویه استافیلوکوکوس کاپرا (7/22%)، 5 سویه استافیلوکوکوس ساپروفیتیکوس (3/11%)، 2 سویه استافیلوکوکوس اپیدرمیدیس (5/4%) و یک سویه استافیلوکوکوس سیمولانس (2/2%) به روش آزمایشگاهی مورد تشخیص قرار گرفتند. کلیه جدایه ها با استفاده از روش pcr نیز مورد تأیید قرار گرفتند. حساسیت یا مقاومت آنتی بیوتیکی جدایه ها با استفاده از روش انتشار از دیسک توسط 14 آنتی بیوتیک مختلف ارزیابی گردید. بر اساس نتایج بدست آمده 44 جدایه (100%) حداقل به یک آنتی بیوتیک مقاوم بودند. بیشترین میزان مقاومت به ترتیب نسبت به پنی سیلین (54/79%)، سفکسیم (54/79%)، استرپتومایسین (81/56%) و کلوکساسیلین (50%) مشاهده شد. 100% و 73/97% جدایه ها به ترتیب نسبت به سیپروفلوکساسین و ونکومایسین حساسیت نشان دادند. از مجموع 44 جدایه مورد مطالعه، 10 جدایه (73/22%) دارای ژن کدکننده برای یک نوع انتروتوکسین بودند. بیشترین فراوانی مربوط به ژن کدکننده انتروتوکسین a (sea) (6جدایه، 60%) و سپس sec (4 جدایه، 40%) بود. هیچکدام از جدایه ها واجد ژن های seb، sed و see نبودند. با توجه به مقادیر بالای آلودگی استافیلوکوکوسی در شیر و مقاومت قابل توجه به آنتی بیوتیک های مختلف، استافیلوکوکوس های انتروتوکسیژنیک در شیر خام به عنوان یک خطر بالقوه برای سلامت مصرف کنندگان می باشند. لذا تشخیص این سویه ها و کنترل منابع آلودگی شیر باید به عنوان بخشی از استانداردهای کنترل کیفی شیر و فراورده های لبنی مورد توجه قرار گیرد.