در این مطالعه آنزیم پروتئازی از فلور میکروبی چشمه آب گرم و معدنی دیگ رستم استخراج، خالص سازی و برخی ویژگی های آن تعیین شد. در اولین مرحله غربالگری وکشت تک کلنی تولید کننده پروتئاز انجام شد و سپس به کمک روش های بیوشیمیایی و مولکولی، جنس آن تعیین شد. در مرحله بعد، شرایط برای تولید بهینه آنزیم فراهم شد و بعد از آن به کمک روش های کروماتوگرافی همچون کروماتوگرافی تبادل یونی و ژل فیلتراسیون، آنزیم 21 برابر محیط کشت اولیه خالص سازی شد. آنزیم خالص شده دارای وزن مولکولی 74 کیلودالتون بود، همچنین8ph=، ph بهینه فعالیت و پایدارترین ph برای آنزیم بود. ویژگی برجسته این آنزیم فعالیت خوب آن در محدوده وسیعی از ph (5 تا 11) و دما (30 تا 70 درجه سانتی گراد) می باشد. در بررسی اثر یون های فلزی، یون های ca+2، mg+2، cu+2، افزاینده فعالیت آنزیمی و یون های zn+2وmn+2 کاهنده فعالیت آنزیمی بودند. از طرفی edta به عنوان یک شلاته کننده یون های فلزی باعث کاهش شدید فعالیت آنزیمی شد و این فرضیه مطرح شد که آنزیم جزءگروه متالوپروتئازها باشد. در بین دترجنت ها و سایر عوامل شیمیایی مورد بررسی، اثر کاهندگی فعالیت دترجنت کاتیونی ctab بیشتر از نوع آنیونی(sds) و خنثی (تریتون x-100) بود. ضمناَ برعکس پراکسید-هیدروژن(h2o2)که افزایش غلظت آن باعث کاهش شدید فعالیت می شود، حلال نیمه قطبی dmso باعث افزایش فعالیت آنزیمی می شود. آنزیم مورد مطالعه ویژگی بالایی به کازئین نسبت به دو سوبسترای دیگر bsa و ژلاتین نشان می داد.