جداسازی آماستیگوتها از زخم موشهای balb/c .کشت و تکثیر آماستیگوتها به طور in vitro.جداسازی غشاء آماستیگوتها و تجزیه آن به فراکسیونهای مختلف .انجامfusion و تولید آنتی بادی منوکلونال بر علیه آنتی ژن p4 غشایی آماستیگوت.جداسازی پروتئین p4 از غشاء آماستیگوت با sds-page و روش negative staining .خالص سازی پروتئین بدست آمده با elution . تشخیص پروتئین استخراجی به وسیله western blotting -ارزیابی پروتئین با استفاده از آنتی بادی مونوکلنال تهیه شده