نام پژوهشگر: ام البنین رضایی کیاسری

بیان ژنهای بلوغ و رسپتورهای آنها در طی بلوغ آزمایشگاهی توده های coc گوسفند در حضور سلولهای گرانولوزا
پایان نامه وزارت علوم، تحقیقات و فناوری - دانشگاه علم و فرهنگ - پژوهشکده رویان 1389
  ام البنین رضایی کیاسری   مجتبی رضازاده ولوجردی

هدف این مطالعه بررسی اثر سیستم هم کشتی با سلولهای گرانولوزا مورال بر بلوغ توده های coc گوسفند بوده است، همچنین مراحل بلوغ هسته و سطح بیان ژنهای بلوغ و رسپتورهای آنها در دو مرحله ژرمینال وزیکول (gv) و متافاز دوم (mii) ارزیابی شد. توده های coc جدا شده از تخمدان بطور تصادفی به چهار گروه تقسیم شدند: در گروههای کنترل توده های coc به ترتیب بمدت 3 و 27 ساعت در محیط بلوغ قرار گرفتند (3h control and 27h control) و در گروههای هم کشتی توده های coc به ترتیب بمدت 3 و 27 ساعت در محیط بلوغ هم کشت با سلولهای گرانولوزا مورال قرار گرفتند (3h coculture and 27h coculture). یک روز قبل از هم کشتی غیر تماسی، سلولهای گرانولوزا با تعداد 120 - 110 هزار سلول در چاهک ظروف چهار خانه کشت داده شدند. توده های coc خوب روی فیلتر insert قرار گرفته و سپس فیلتر درون چاهک پوشیده از سلولهای گرانولوزا گذاشته شد. مرحله بلوغ تخمک بوسیله رنگ آمیزی با هوخست تعیین گردید و حالتهای بلوغی آنها مشخص گردید (gv و mii). سطح بیان ژنهای بلوغ (bmp15, bmp6, gdf9) و رسپتورهای آنهاalk3(bmpria) ,alk5(tgf?ri) alk6(bmprib) ,bmprii , actriib وhas2 و ptgs2 نیز بوسیله real time pcr بررسی گردید. مقایسه میزان بلوغ تخمکها مشخص می کند که درصد تخمک های مرحله mii بطور معنی داری در گروه هم کشتی در مقایسه با گروه کنترل بالاتر است (p<0.05). نتایج بیان کمی ژنهای بلوغ بوسیله real time نشان داد که در مورد ژنهای bmp15, bmp6, alk3, has2 و ptgs2 تفاوت معنی داری بین گروهها وجود ندارد. بیان ژنهای actriib, bmprii و alk6 در گروه کنترل 27 ساعته نسبت به سایر گروهها افزایش معنی داری داشته است(p<0.05)، همچنین بیان اکثر ژنها نیز در تخمکهای mii گروه هم کشتی نسبت به گروه کنترل کاهش داشته است. نتیجه گیری: استفاده از سیستم هم کشتی با سلولهای گرانولوزا مورال در طی بلوغ آزمایشگاهی تخمک باعث افزایش میزان بلوغ تخمکها (تخمکهای mii) و بهبود سطح بیان اکثر ژنها می شود.