نام پژوهشگر: نفیسه ابوفاضلی

همسانه سازی ژن gtp سیکلوهیدرولاز i از گوجه فرنگی (lycopersicum esculentum l.)
پایان نامه دانشگاه بین المللی امام خمینی (ره) - قزوین - دانشکده مهندسی 1389
  نفیسه ابوفاضلی   امیرحسین بیکی

یکی از آنزیم هایی که در فرآیند تولید اسید فولیک نقش قابل توجهی دارد، آنزیم gtp سیکلوهیدرولاز i است. با افزایش بیان ژن کد کننده gtp سیکلوهیدرولاز i می توان به گیاهان تراریخته ای دست یافت که دارای میزان بالاتری از این ویتامین می باشند. با توجه به اینکه ژن gtp سیکلوهیدرولاز i در بافت میوه گوجه فرنگی بیان می شود، ابتدا rna کل در مرحله سبز، از بافت میوه گوجه فرنگی استخراج گردید و پس از سنتز cdna، با استفاده از فن آوری واکنش زنجیره ای پلیمراز (pcr) و آغازگرهای اختصاصی، ژن gtp سیکلوهیدرولاز i (gchi) تکثیر شد. در مرحله بعد، به منظور تخلیص و نگهداری ژن gchi، درون فاژمید pbluescript همسانه سازی گردید و سازه حاصل pblue-gchi نام گرفت تا بتوان از آن در سایر تحقیقات مولکولی، از جمله انتقال ژن، استفاده نمود. ژن gtp سیکلوهیدرولاز i به طولbp 1371 در جهت سنس، در ناقل دوگانه pbi121 همسانه سازی و ناقل نوترکیب فوق به داخل باکتری اگروباکتریوم pgv3101 انتقال داده شد و بدین ترتیب این ژن برای انتقال به گیاهان مختلف آماده گردید. توالی نوکلوتیدی بدست آمده از ژن gtp سیکلوهیدرولاز i در رقم مِموری 1، 99 درصد تشابه را با توالی نوکلوتیدی موجود در بانک ژنی ncbi، مربوط به واریته میکروتوم، نشان داد. آنالیز توالی اسید آمینه این ژن با استفاده از نرم افزار editseq نشان داد که وزن مولکولی این پروتئین برابر kd 50 می باشد. مقایسه توالی اسید آمینه ای بدست آمده با توالی های ثبت شده در بانک ژنی ncbi مربوط به گیاهان گوجه فرنگی واریته میکروتوم، گندم، جو، آرابیدوپسیس، برنج و ذرت درصد تشابه بین 50 تا 99 درصد را نشان داد.