سلول های باسیلوس لیکنی فرمیس از طریق به دام اندازی در ریزمهره های کلسیم آلژینات تثبیت شدند و بیوکاتالیست های تثبیت شده برای تولید پروتئاز قلیایی به روش batch های تکرار شونده مورد استفاده قرار گرفتند. روش تثبیت با تاکید بر پایداری بیدها به روش آماری فاکتوریل کامل بهینه سازی شد که دو فاکتور نوع آلژینات و غلظت کلرید کلسیم هر کدام در سه سطح و در دو سرعت هم خوردن محیط مورد آزمایش قرار گرفتند. همچنین تاثیر بهینه سازی محیط کشت تولید با استفاده از روش تاگوچی و به دام اندازی سلول ها در بیدهای کلسیم آلژینات بر تولید پروتئاز قلیایی مورد بررسی قرار گرفت. نتایج نشان داد که بهینه سازی محیط کشت و تثبیت سلولی هر دو می توانند باعث افزایش تولید پروتئاز قلیایی شوند به طوری که بهره وری حاصل در این شرایط در مقایسه با حالت سلول های آزاد در محیط قبل از بهینه سازی، 3/7 برابر افزایش یافت. روش batch های تکرار شونده با استفاده از شرایط بهینه شده تثبیت نیز برای 12 سیکل به طور موفقیت آمیز مورد استفاده قرار گرفت. واژگان کلیدی: باسیلوس لیکنی فرمیس، پروتئاز قلیایی، تثبیت سلولی، بهینه سازی، روش آماری فاکتوریل کامل، روش تاگوچی