پیرووات کیناز آنزیمی کلیدی در مسیر گلیکولیز است که انتقال یک گروه فسفر از فسفو انول پیرووات به adp را کاتالیز نموده و منجربه تولید پیرووات و atp می شود. با توجه به اهمیت بالای این آنزیم در اکثر موجودات زنده، و استفاده روزافزون از آن در زمینه های گوناگون، مراحل تخلیص این آنزیم، به منظور آشنایی بیشتر با خصوصیات نوعی پیرووات کیناز متعلق به یک geobacillus بومی ایران، که قبلا در وکتور pet-28a کلون شده بود، انجام شد. پس از آن برای شناسایی نقاط انعطاف پذیر و در دسترس این آنزیم از تکنیک پروتئولیز محدود در حضور دو پروتئاز تریپسین و ترمولیزین استفاده شد. با توجه به ویژگی های سوبسترایی متفاوت این پروتئازها و قابلیت فعالیت آنها در دماهای متفاوت، اطلاعات مفیدی در رابطه با دمین های ساختاری پیرووات کیناز مورد مطالعه به دست آمد. سپس تاثیر گلایسین، سوکروز و mg2+ به طور جداگانه بر الگوی پروتئولیز در دمای ?c60 بررسی شد. مطالعات طیف جذبی آنزیم پیرووات کیناز در حضور این افزودنی ها تغییر در شکل فضایی پیرووات کیناز را نشان داد. سرعت پروتئولیز در حضور افزودنی ها کاهش یافت اما نقاط مستعد جدیدی در معرض قرار نگرفت و نقاط قبلی نیز همچنان نسبت به پروتئولیز حساس بودند. نتایج این مطالعات به تفسیر و شناسایی قطعات حاصل از پروتئولیز کمک نمود. فعالیت آنزیمی پیرووات کیناز نیز در تمام مراحل به صورت سنجش همراه با آنزیم لوسیفراز محاسبه شد. در نهایت به منظور تعیین خصوصیات دقیق و نیز نقاط مستعد پروتئولیز، جداسازی قطعات حاصل از پروتئولیز محدود به کمک روش الکتروفورز preparative انجام شد.