نام پژوهشگر: نادیا صالحی

تراریختی و بیان ژن کلسی تونین انسانی در کلروپلاست گیاه تنباکو
پایان نامه دانشگاه تربیت معلم - تبریز - دانشکده علوم پایه 1388
  نادیا صالحی   حمیده افقی

امروزه استفاده از تکنولوژی گیاهان تراریخت به عنوان جایگزین مناسبی برای تولید پروتئین های نوترکیب می باشد. دستکاری های ژنتیکی از طریق ژنوم پلاستیدی به ویژه ژنوم کلروپلاست، مزایای متعددی نظیر، توان بیان بسیار بالا (تقریبا 60 کپی کروموزوم حلقوی در هر پلاستید و تقریبا 60-50 کلروپلاست در هر سلول)، توانائی بیان ژن های چندگانه و عدم انتقال ناخواسته ژن خارجی توسط دانه گرده را فراهم نموده است. با توجه به ویژگی های بی نظیر تراریختی پلاستیدی، علاقه زیادی برای به کارگیری این سیستم ها جهت تولید پروتئین های درمانی نوترکیب وجود دارد. کلسی تونین یک هورمون پپتیدی تک زنجیره می باشد که از 32 اسید آمینه تشکیل شده و دارای نقش اساسی در بکارگیری و استفاده از کلسیم و فسفر و حمایت از سیستم اسکلتی بدن در شرایط استرس کلسیم می باشد. همچنین کلسی تونین از دسته پپتیدهائی است که از پوکی استخوان جلوگیری می نماید. در این بررسی ، ژن پروتئین کلسی تونین به منظور انتقال به کلروپلاست انتخاب شده است. به این منظور ژن hct دارای دو جایگاه آنزیمی مشابه bamhiدر دو سمت خود و با ترجیح کدونی تنباکو با طولی در حدود 102 جفت باز به صورت کلون شده در پلاسمید p-pcr script دریافت شد. ژن جداسازی شده کلسی تونین تحت کنترل پروموتر prrn (که یک پروموتر دائمی و بسیار قوی در سیستم های کلروپلاستی و باکتریایی است) و خاتمه دهنده rbcl(chl)، درون ناقل کلروپلاستی pkcz کلون گردید و با استفاده از تفنگ ژنی به گیاه انتقال داده شد.