پروتئینهای شوک حرارتی (hsp) ،از مایکو باکتریوم توبرکلوزیس، توسط سلولهای t شناسایی می شوند و لذا می توانند در همراهی با آنتی ژنهای مناسب پاسخ ایمنی قابل قبولی را بر علیه عفونتهای ویروسی، عفونتهای باکتریال و یا سایر عوامل عفونی القا نمایند. مهمترین دلیل ما نیز برای استفاده از ( c-terminal )hsp70 359-610 ،خاصیت adjuvant قوی این بخش از مولکول hsp70 است. این مولکولها می تواند پاسخ سلولهای ایمنی را افزایش دهند ؛علاوه براین می توانند باعث پیشرفت اثرات درمانی تولید شده بوسیله واکسنهای نوترکیب شوند. ما در این تحقیق در مرحله اول ، اقدام به طراحی پرایمر برای جداسازی ژن hsp70 از باکتری سل نمودیم. پس از بهینه نمودن شرایط pcr ،با استفاده از پرایمرهای اختصاصی ،قطعه ( c-terminal )hsp70 359-610 مورد نظر تکثیر گردید ؛سپس بر روی ژل 1% برده شد،تخلیص گردید و پس از تخلیص قطعه مورد نظر از روی ژل 1%به کمک تکنیک t/a وکتور بداخل وکتور ptz57r/t dna کلون گردید .در نهایت هضم آنزیمی وکتور بیانی pqe-30 وبطور جداگانه وکتور کلونینگ ptz57r/t dna که حاوی قطعه مورد نظر ماست بوسیله آنزیمهای, bamhi hindiii انجام گرفت که در نتیجه آن وکتور pqe-30 به حالت linear در آمد ونیز قطعه ( c-terminal )hsp70 359-610 از داخل وکتور کلونینگ فوق بیرون کشیده شد .سپس عمل ligation میان وکتورpqe-30 و dnaتخلیص شده از ژل انجام شد و سرانجام آنالیز پلاسمید نوترکیب با استفاده از هضم آنزیمی ،تائید کلونینگ (تایید اولیه با استفاده از ژل الکترو فورز و تایید نهایی با استفاده از pcr )و در آخر تعیین توالی ژن hsp70 صورت گرفت ؛ پس از کلون شدن ژن hsp70 درون پلاسمید pqe-30 منطقه مورد نظر (منطقه واقع بین دو جایگاه , bamhi hindiii) تعیین توالی شد.درنهایت صحت و انطباق کلونینگ ژن با pcr ، هضم آنزیمی و تعیین توالی ژن تایید شد.

چکیده بارزترین نقش پروتئین m2 در ویروس a آنفولانزا ایجاد یک کانال یونی یکطرفه برای عبور h+ به درون ویروس می باشد. این قابلیت در اسیدی شدن محتویات ویروس و رها سازی ژنوم آن به درون سیتوپلاسم میزبان نقش داشته و امری حیاتی برای تکثیر ویروس به شمار می رود. بر اساس شواهد، انسداد این کانال از تأثیر ویروس بر سلول میزبان جلوگیری کرده و مانع بیماریزایی آن می شود. با توجه به اهمیت این پروتئین کانالی در ارائه راه کارهای جدید برای مقابله با انواع ویروسهای a آنفولانزا که بسیاری از جمعیتهای حیوانی و انسانی را تهدید می کنند، این تحقیق سعی دارد تا با توالی یابی ژن مسئول سنتز این پروتئین چشم اندازروشنی را برای تولید آنتی بادی ها و داروهای جدید محدود کننده این ویروس ایجاد کند. در این تحقیق سعی شده است تا میزان بالای حفظ توالی (sequence conservation) ژنی، از طریق مقایسه توالی ژن m2ای که از یک ویروس a آنفولانزا با نام علمی a/chicken/iran/101/1998(h9n2) استخراج شده است با دیگر توالی هایی از این ژن که در تحت تیپهای متداول این ویروس در سطح جهان وجود دارند، نشان داده شود. همین امر نقش آنتی ژنی این پروتئین را نسبت به دیگر آنتی ژنهای معروف این ویروس که هر ساله دچار تغییر می شوند و نسبت به داروهای مهار کننده مقاومت نشان می دهند، دو چندان می کند. کلون این ژن به کمک وکتور متعارف pqz57rt که نوعی taوکتور بی نیاز از آنزیم برشی است، در سویه dh5? از باکتری ای کولی انجام پذیرفت. این روش چنانچه باکتریهای کلون شده در شرایط انجماد استاندارد قرار بگیرند امکان نگهداری نامحدود کلونیها را فراهم می کند و از طرفی تکثیر مجدد باکتریها و استخراج ژن از آنها را به سادگی امکان پذیر می سازد. در انتها نیز با انتقال این ژن به یک وکتور دیگر بنام pegfp-n1 که نوعی وکتور بیانی است و قادر به ترجمه ژن در سلولهای پستانداران می باشد، مقدمات لازم برای تولید پروتئین این ژن ایجاد گردید.