مقدمه:بیماری تب مالت یا بروسلوز یک بیماری مشترک بین انسان و دام است. بروسلوز مشکل عمده بهداشت عمومی در مناطق مختلف دنیا مطرح است.با توجه به خسارات ناشی از شیوع بروسلوز ،.تشخیص به موقع و دقیق این بیماری بسیار حائز اهمیت می باشد. بنابراین شناسایی سریع بروسلا با سیستم bactec وpcr ممکن است منجر به تشخیص سریعتر و بهبود کیفیت درمان بیماران گردد. هدف ما در این مطالعه ارزیابی تکنیک pcr به عنوان یک ابزار تشخیصی برای بروسلوزیس و مقایسه با دیگر تکنیک های متداول باکتریولوژیکی می باشد. روش کار:. مجموع 100 بیمارمشکوک به بروسلوز در این مطالعه وارد شد کشت نمونه خون با استفاده از دستگاه bactec 9050 انجام شده و pcr ژنوم با پرایمرهای اختصاصی برای تکثیر ژن bcsp31بروسلا که آنتی ژن پروتئین غشائی kda31 را کد می کند و ژن eryd که مسئول نسخه برداری می باشد و ژن omp31 که یک پروتئین غشایی است استفاده شد.از این میان 37 نمونه برای ارزیابی pcr خون توسط ژن های bcsp31 و eryd مورد بررسی قرار گرفت.تمامی نمونه ها جهت تعیین گونه بروسلا توسط ژن های ttcopep و is711 مورد ارزیابی pcr قرار گرفت. نتایج:از مجموع 100 مورد سرولوژی مثبت ، تعداد39 نمونه، پس از کشت در دستگاه bactec 9050 روی محیط کشت بروسلا آگار جدا شدند.از میان 39 نمونه مثبت 23 نمونه برای ارزیابی pcr خون و 14نمونه کشت آنها در بروسلا آگار منفی شد.پس از pcr خون تام نمونه های کشت مثبت همگی مثبت شدند و از میان 14 نمونه کشت منفی 13 مورد مثبت شدند. تمام باکتری های جدا شده از کشت به طور جداگانه با پرایمر اختصاصی بروسلا ملی تنسیس و و پرایمر اختصاصی بروسلا آبورتوس pcr شدند که در تمام موارد باند اختصاصی مربوط به بروسلا ملی تنسیس شناسایی شد. بحث و نتیجه گیری: در این مطالعه ما به بررسی روش ملکولی pcr در تشخیص بروسلوز پرداختیم و نتایج بدست آمده نشان داد که pcr ابزار بسیار مفیدی برای تشخیص سریع بروسلوز با توجه به ژن های مورد نظر می باشد.

تکنیک های مولکولی مانند واکنش زنجیره ای پلیمراز (pcr) روش تشخیصی سریع و قابل اعتماد برای شناسایی پاتوژن های میکروبی می باشند. در دهه¬های اخیر در پی درمان آنتی¬بیوتیکی، سودوموناس آئروژینوزا به عنوان یکی از مهم¬ترین پاتوژن بیمارستانی شناسایی شده است که باعث عفونت¬های حاد و مزمن در افراد بستری در بیمارستان می¬شود. بسیاری از روش های تشخیصی بر اساس pcr برای شناسایی سودوموناس آئروژینوزا توسعه یافته اند، بااین حال بسیاری از پروتکل ها تنها یک ژن هدف را شناسایی می کنند و این روش ها، شناسایی جامع و قابل اعتمادی را برای شناسایی این باکتری فراهم نمی نمایند، زیرا گونه سودوموناس آئروژینوزا گرفته شده از بیماران تنوع ژنوتیپی بالایی را نشان می دهد. برای غلبه بر این مشکلات از چندین روش pcr استفاده شده است. اما با توجه به مبادلات ژنتیکی بین سودوموناس آئروژینوزا و باکتری های مرتبط نزدیک به آن این تکنیک اغلب اختصاصیت پایینی دارد. بنابراین نیاز به طراحی روش¬های واجد اختصاصیت بالا مبتنی بر پروب اختصاصی و multiplex pcr برای تأیید تشخیص سودوموناس آئروژینوزا وجود دارد. در این مطالعه از دو روش مولکولی multiplex pcr و روش رنگ سنجی نانوذرات طلا استفاده و حساسیت و اختصاصیت این دو روش مورد ارزیابی قرار گرفت. بهینه سازی multiplex pcr و اختصاصیت و حساسیت آن با استفاده از چهار ژن اختصاصی سودوموناس آئروژینوزا (oprl، opri، toxa و rdna 16s) صورت پذیرفت و نتایج نشان دهنده اختصاصیت 100 درصد می باشد. برای ژن 16s rdna در نهایت تأیید تشخیص این باکتری با استفاده از پروب نانوذرات طلا مورد بررسی قرار گرفت. پروب متصل شده به نانوذرات طلا در حضور dna هدف باعث تجمع نانوذرات طلا به شکل شبکه ای متصل به هم و درنتیجه تغییر رنگ می شود. این تغییر رنگ نشان دهنده وجود مولکول هدف در نمونه بوده و به روش چشمی هم قابل مشاهده است.