بلایت فوزاریومی سنبله در گندم که توسط قارچ f. graminearum ایجاد می شود، در مناطق مرطوب و نیمه مرطوب جهان از نظر اقتصادی به عنوان یک بیماری مهم گندم بشمار می آید. این بیماری نه تنها باعث کاهش معنی دار عملکرد دانه بلکه کیفیت دانه را نیز تحت تاثیر قرار می دهد. دی اکسی نیوالنول (don) یکی از مهمترین سم های تولید شده توسط قارچ در دانه های آلوده می باشد که برای سلامت انسان و دام مضر می باشد. don به عنوان عامل بیماری زا از طریق مهار سنتز پروتیین های یوکاریوتی میزبان فعالیت می کنند. جایگاه عمل don زیر واحد s60 پروتیین ریبوزومی l3 rpl3)) می باشد. تغییرات نقطه ای در اسید آمینه های پروتیین ریبوزومی l3 rpl3)) در مخمر باعث ایجاد مقاومت به don شده است. همانند سایر پروتیین های ریبوزومی، توالی rpl3 به میزان بالایی در موجودات یوکاریوت حفاظت شده است. به دلیل هگزاپولویید بودن گندم نان, شش ژن همولوگ rpl3 در آن وجود دارد؛ سه ژن هومیولوگ از دو نوع rpl3a و rpl3b. توالی یابی ژن های کد کننده rpl3 نشان داده است که هیچ تفاوتی میان توالی اسید آمینه ای رقم حساس و مقاوم گندم وجود ندارد. هدف اصلی از این تحقیق تشخیص تغییرات احتمالی ایجاد شده در سطح رونوشت ژن های rpl3 (انواع a و b) تحت تنش fhb در گندم است. بدین منظور، از خوشه های آلوده به قارچ بیماری زا و غیر آلوده سه رقم sumai3 (مقاوم)، ،frontana (نیمه مقاوم) و فلات (حساس) در بازه های زمانی 1، 3 و 7 روز بعد از آلودگی استخراج rna انجام شد. آزمون های rt-pcr نیمه کمی و کمی همراه با آغازگرهای اختصاصی ژن rpl3 (انواع a و b) برای تشخیص تفاوت در سطح رونوشت این ژن ها بین ارقام حساس و مقاوم انجام گرفت. اطلاعات به دست آمده کاهش در سطح بیان ژن گیاه آلوده نسبت به غیرآلوده در ارقام sumai3 و falat طی 24 ساعت اولیه بعد از آلودگی را نشان می دهد و افزایش در سطح بیان ژن در بازه زمانی 7 روز پس از آلودگی گیاه آلوده نسبت به غیرآلوده در رقم frontana را نشان می دهد.

کلزا یکی از مهمترین گیاهان تولید کننده روغن در جهان می¬باشد. امروزه بهینه¬سازی کاشت، داشت و برداشت این گیاه مورد توجه قرار گرفته است. یکی از مشکلات کاشت کلزا علف¬های هرز و کنترل آنهاست. ازمیان روش¬های مرسوم و موثردر کنترل علف¬های هرز می¬توان به استفاده از علف¬کش¬های قوی با طیف وسیع عمل، نظیر گلایفوسیت، اشاره کرد. گلیفوسیت یک علف¬کش غیر انتخابی با دامنه¬ی عملکرد وسیع می¬باشد که آنزیم 5- انول پیروویل شیکیمات 3- فسفات سنتاز را به طور رقابتی مهار می¬کند. آنزیم epsps یک آنزیم اساسی در ساخت آمینو¬اسیدهای حلقوی در گیاهان، باکتری¬ها و برخی از قارچ¬ها می¬باشد. یکی از موثرترین راه¬های ایجاد گیاهان مقاوم به علف¬کش گلیفوسیت، دست¬ورزی ژن کد کننده¬ی آنزیم 5-انول پیروویل شیکیمات 3-فسفات سنتاز به منظور کاهش تمایل گلیفوسیت به این آنزیم می باشد. در مطالعات گذشته از روش sdm (site directed mutagenesis)برای ایجاد 2 جهش از نوع جانشینی در ژن epsps e. coli انجام شد تا اسید آمینه¬ی گلیسن 96 را به آلانین و آلانین 183 را به ترئونین تبدیل کند. در این تحقیق ژن epsps جهش دار شده به پپتید نشانه کلروپلاستی ژن epsps گیاه کلزا با آغازگرهای هم¬پوشان متصل شد. سپس ژن epsps دستکاری شده در ناقل puc19 و pbi121 همسانه سازی شد. آنالیز¬های ملکولی و نتایج توالی¬یابی نشان داد که ژن به خوبی تغییر یافته است و در هر دو ناقل در جهت مناسبی قرار گرفته است. ناقل بیانی pbi121 حامل ژن از طریق باکتری agrobacterium tumefaciens سویه lba4404و gv3101به گیاه کلزا رقم¬های pf-704591و hyola308 منتقل شد. از انتهای بریده شده برگ¬های لپه¬ای به عنوان بافت هدف جهت انتقال ژن استفاده گردید. گیاه–تکه¬ها به محیط¬های گزینشگر القاء نوساقه، طویل شدن نوساقه و ریشه زایی منتقل شدند. حضور و بیان ژن مورد نظر با آزمون های ملکولی تایید شد.

ویروس هاری یک ویروس rna دار و گلوله ای مانند است که متعلق به خانواده rhabdoviridae وجنس lyssavirus است. سالانه تقریبا 55000 نفر بر اثر ابتلا به این بیماری حاد پیش روند? سیستم عصبی مرکزی جان خود را از دست می دهند. گونه های متفاوت ویروس هاری به لحاظ بیماریزایی در موارد طبیعی و آزمایشگاهی نمودهای متفاوتی دارند. در این تحقیق برای مشخص کردن تفاوتهای موجود در الگوی بیان پروتئین های مغز موش های آلوده به دو گون? ویروس هاری، از تکنیک پروتئومیکس استفاده شد. موش های نژاد nmri به وسیل? دو گون? ویروسی خیابانی (street) و pasteur، از طریق تزریق درون ماهیچه ای آلوده شدند. بعد از ظهور علائم فلج، پروتئین های سلولهای بافت مغز استخراج شده و الگوی پروتئینی آنها با استفاده از روش الکتروفورز دوبعدی به دست آمد. در نهایت به منظور تعیین تفاوت های موجود در الگوی بیانی پروتئین ها بین نمونه های کنترل و نمونه های آلوده شده توسط گونه های street و pasteur، ژل های دوبعدی بوسیل? نرم افزار image master 2d platinum® آنالیز شدند. در مقایسه با نمونه های کنترل، در نمونه های آلوده شده توسط سوی? street، یک پروتئین افزایش بیان پیدا کرده بود، یک پروتئین حذف شده بود و دو پروتئین نیز نوظهور بودند؛ و اما در نمونه هایی که بوسیل? سوی? pasteur آلوده شده بودند در مقایسه با گروه کنترل، شش پروتئین کاهش بیان داشتند و یک پروتئین نیز حذف شده بود. بعلاوه، در مقایس? الگوی پروتئینی نمونه های آلوده شده توسط سوی? pasteur با نمونه های آلوده شده با سوی? street مشخص شد که سه پروتئین افزایش بیان و شانزده پروتئین کاهش بیان داشته اند و همچنین 12 پروتئین نوظهور نمایان شدند. سو یه های ویروسی pasteur و street نمود های متفاوتی در بیماریزایی دارند و بنابراین نمونه های آلوده شده با این دو سویه در سطح پروتئینی دارای الگوی بیانی متفاوتی هستند. با استفاده از طیف سنجی جرمی اطلاعات دقیق تری راجع به نحو? بیماریزایی این دو سویه به دست خواهد آمد که نه تنها منجر به فهم بیشتر روند مولکولی بیماری و نحو? بیماریزایی سویه های مختلف هاری می گردد بلکه می تواند منجر به کمک در کشف روش درمان شود.

در این مطالعه بمنظور ساخت پیشبرهای القاء شونده توسط بیمارگر ها سه عنصر کنشی سیس شامل عناصر f، e17 و d باکس به عنوان عناصر بالقوه القاء شونده توسط بیمارگر ها بر اساس مطالعات گذشته انتخاب شدند و عملکرد آنها در پاسخ به یک محرک عمومی، دو هورمون گیاهی مرتبط با سیستم دفاعی، چند بیمارگر قارچی و شرایط محیطی مختلف مورد بررسی قرار گرفت. بدین منظور با استفاده از روش ساخت پرموترهای مصنوعی، توالی های دو نسخه ای و ترکیبی از عناصر انتخاب شده در بالادست توالی مینیمال پیشبر مربوط به camv 35s کلون گردید و سازه های pgff، pgee، pgffdd، pgffee و pgddee ساخته شدند که به ترتیب پیشبر های sp-ff، sp-ee، sp-ffdd، sp-ffee و sp-ddee را در برداشتند. همچنین پیشبر minp با ساخت سازه pgmp به عنوان کنترل منفی و سازه pgc حامل پیشبر کامل cam v35s جهت بهینه سازی مراحل آنالیز بیان تهیه شد. بمنظور بررسی عملکرد پیشبرها ابتدا پتانسیل روش اگروانیجکشن برای آنالیز بیان پیشبرها در گیاه کلزا مورد بررسی قرار گرفت. در این آزمایش ها از سازه pgc و ناقل pbi121 استفاده شد و بیان ژن gus در گیاهان کلزا، توتون و لوبیا مقایسه شد. نتایج اگروانیجکشن نشان داد سازه pgc در برگ توتون و بافت غلاف لوبیا قادر به بیان ژن gus می باشد. در این آزمایش ها بیان باکتریائی ژن gus در محل نفوذ سوسپاسیون اگروباکتریوم حامل ناقل pbi121 در برگ کلزا و لوبیا مشاهده نشد. با استفاده از روش ریزپرتابی نشان داده شد که سازه pgc قادر به بیان ژن gus در برگ کلزا می باشد. با توجه به نتایج بدست آمده نشان داده شد که سازه pgc در گیاه کلزا، لوبیا و توتون فعال است. بمنظور آنالیز عملکرد، پیشبرها بطور دائمی با استفاده از روش کوتیلدونی به گیاه کلزا منتقل شدند و تراریختی گیاهان حاصل با استفاده از آزمون pcr و بیان ژن gus تایید شد. دیسک های برگی مربوط به گیاهان تراریخت حامل پیشبرهای مختلف، جهت آنالیز عملکرد استفاده شدند. نتایج هیستوشیمیائی نشان داد پیشبرهای مورد استفاده در پاسخ به آلودگی مستقیم با قارچ های اسکلروتینیا اسکلروتیوروم، رایزوکتونیا سولانی و فوزاریوم گرامیناروم سطح بیان و القاء پذیری متفاوتی نشان دادند. مطالعات فلوریمتری نشان داد مواد آزاد شده از قارچ های مورد مطالعه نیز قدرت القاء کنندگی دارند. واکنش پیشبرها به قارچ های اسکلروتینیا و رایزوکتونیا کاملاً متفاوت بود در حالیکه در پاسخ به تیمار قارچ فورازیوم تمامی آنها القاء پذیری نشان دادند. در این بین پیشبر sp-ff به قارچ اسکلروتینیا و پیشبر sp-ee به قارچ رایزوکتونیا واکنش نشان دادند. در حالیکه پیشبرهای sp-ffee، sp-ddee و sp-ffdd در پاسخ به بیمارگر بیوتروف رایزوکتونیا القاء پذیری بالائی نشان دادند. در این مطالعه عملکرد پیشبرها در پاسخ به تیمارهای کیتین، سالیسیلیک اسید و متیل جاسمونات نیز مورد بررسی قرار گرفت. نتایج نشان داد پیشبرهای sp-ddee و sp-ff به تیمار کیتین، sp-ddee، sp-ffee، sp-ee به تیمار سالیسیلیک اسید و پیشبرهای sp-ff، sp-ffdd و sp-ddee به تیمار متیل جاسمونات القاء پذیری بالائی نشان دادند. پیشبرهای ساخته شده در پاسخ به تیمار زخم شدگی و سرما از خود واکنش نشان ندادند، همچنین در پاسخ به تیمارهای گرما و uv عمده پیشبرها غیر فعال بودند و تنها دو پیشبر sp-ddee و sp-ffdd تاحدی القاءپذیر بودند. براساس نتایج بدست آمده میتوان نتیجه گیری کرد که در گیاه کلزا عنصر e17 تا حد زیادی با مسیرهای پیام رسانی سالیسیلیک اسید در ارتباط است در حالیکه عنصر f با مسیر پیام رسانی متیل جاسمونات ارتباط بیشتری دارد و عنصر d القاء پذیری عمومی در پاسخ به محرک های مختلف نشان داد.

امروزه استفاده از تکنولوژی گیاهان تراریخت به عنوان جایگزین مناسبی برای تولید پروتئین های نوترکیب می باشد. دستکاری های ژنتیکی از طریق ژنوم پلاستیدی به ویژه ژنوم کلروپلاست، مزایای متعددی نظیر، توان بیان بسیار بالا (تقریبا 60 کپی کروموزوم حلقوی در هر پلاستید و تقریبا 60-50 کلروپلاست در هر سلول)، توانائی بیان ژن های چندگانه و عدم انتقال ناخواسته ژن خارجی توسط دانه گرده را فراهم نموده است. با توجه به ویژگی های بی نظیر تراریختی پلاستیدی، علاقه زیادی برای به کارگیری این سیستم ها جهت تولید پروتئین های درمانی نوترکیب وجود دارد. کلسی تونین یک هورمون پپتیدی تک زنجیره می باشد که از 32 اسید آمینه تشکیل شده و دارای نقش اساسی در بکارگیری و استفاده از کلسیم و فسفر و حمایت از سیستم اسکلتی بدن در شرایط استرس کلسیم می باشد. همچنین کلسی تونین از دسته پپتیدهائی است که از پوکی استخوان جلوگیری می نماید. در این بررسی ، ژن پروتئین کلسی تونین به منظور انتقال به کلروپلاست انتخاب شده است. به این منظور ژن hct دارای دو جایگاه آنزیمی مشابه bamhiدر دو سمت خود و با ترجیح کدونی تنباکو با طولی در حدود 102 جفت باز به صورت کلون شده در پلاسمید p-pcr script دریافت شد. ژن جداسازی شده کلسی تونین تحت کنترل پروموتر prrn (که یک پروموتر دائمی و بسیار قوی در سیستم های کلروپلاستی و باکتریایی است) و خاتمه دهنده rbcl(chl)، درون ناقل کلروپلاستی pkcz کلون گردید و با استفاده از تفنگ ژنی به گیاه انتقال داده شد.

امروزه گیاهان تغییر یافته ژنتیکی مشتقات زیادی را شامل شده اند به گونه ای که در حال حاضر بسیاری از بذور و مشتقات تراریخت در بازار های موجود در جهان وجود دارند و در آینده نیز ، هر کشوری می تواند از این محصولات ترا ریخت استفاده کند، اما بدلیل بعضی از موارد مانند دادن حق انتخاب به مصرف کنندگان برای استفاده از این محصولات به صورت بهینه، تنظیم کیفیت آنها لازم و ضروری بوده است که این امر بستگی به توانایی شناسایی و تعیین سطح کمی ارگانیسم ها دارد .به یکی از مهمترین محصولات تراریخت می توان به سویای مقاوم به علف کش گلایفوسیت اشاره نمود که می بایستی در سطح رخداد خاص خود شناسایی شود. هم اکنون، با توجه به این که عمده سویای مصرفی ایران به عنوان بذور و نمونه های غذایی وارداتی تراریخت می باشد، هدف از این مطالعه انجام آنالیز های مولکولی کیفی و نیمه کمی برای تشخیص و شناسایی بذور سویای مقاوم در سطح رخداد ( gts 40-3-2 ) می باشد به گونه ای محدوده حضور بذور تراریخت در توده های بذور تعیین شده و پس از شناسایی کیفی و کمی، نمونه های بذور وارداتی، دارای شناسنامه اطلاعاتی می شوند. با توجه به این که بهینه سازی تشخیص دقیق بذور تراریخت از جمله سو یای مقاوم به رانداپ وابسته به کیفیت و کمیت dna استخراج شده می باشد ، لذا 2 روش متفاوت ctab و wizard در این مطالعه انجام شده است و بهینه ی روش ها مورد استفاده آنالیزهای بعدی قرار گرفته است . آنالیز های مولکو لی در سطح غربالگری با استفاده از جفت پرایمر های 35s و nos ، در سطح شناسایی و تشخیص با استفاده از جفت پرایمرهای ژن cp4 epsps و rr01-rr02 و رخداد p dna-35s ، در سطح کیفی انجام گردیده است. همچنین آنالیز های نیمه کمی برای سری رقت های مختلف از این بذور تراریخت برای جفت آغاز گر های ذکر شده نسبت به ژن اختصاصی سویا (لکتین) نیز انجام شده است . و حد آستانه تشخیص ( lod) برای تمامی عناصر ترایخت در حد 1% تعیین شده است . در واقع برای اولین بار در ایران ، بهینه سازی سویای مقاوم به رانداپ به صورت جامع تا سطح رخداد ( gts 40-3-2 ) ،هم به صورت کیفی و هم به صورت تشخیص نیمه کمی انجام گردیده است

بیماری سوختگی فوزاریومی یکی از مهم ترین بیماری های گندم است که علاوه بر ایجاد افت در محصول نهایی باعث آلودگی دانه به صد ها مایکوتوکسین به خصوص توکسین دی اکسی نیوالنول می گردد. این مساله که ارقام مقاوم دارای پتانسیل ژنتیکی به منظور سم زدایی و تحمل توکسین های فوزاریوم هستند به تایید رسیده است. با وجود تحقیقات گسترده بر روی این بیماری، مکانیسم های مولکولی دخیل در این امر هنوز به روشنی مشخص نگردیده است. در این تحقیق به منظور شناسایی ژن های با بیان افتراقی در پاسخ به توکسین دی اکسی نیوالنول از روش cdna-aflp استفاده گردید. بذور رقم سومای تری به عنوان رقم مقاوم و رقم فلات به عنوان رقم حساس بر روی محیط کشت حاوی ppm30 توکسین دی اکسی نیوالنول به منظور جوانه زنی قرار گرفتند و نمونه برداری در زمان های صفر، 12 و 48 ساعت و تیمار های دائم بر روی محیط حاوی توکسین انجام گرفت. تمام نمونه های گیاهی در یک مرحله مورفولوژیک برداشت شدند و به منظور استخراج rna کل در نیتروژن مایع منجمد گردیدند. به منظور ساخت mrna از تیوب های پوشیده با استراپتاویدین و آغازگر های دارای بیوتین استفاده گردید. پس از سنتز رشته ی اول و دوم cdna از آنزیم های برشی psti و taqi که دارای جایگاه برشی 6 و 4 نوکلئوتیدی می باشند استفاده گردید. با استفاده از الکتروفورز عمودی باند های با بیان افتراقی جدا شده و همسانه سازی با استفاده از کیت clonejet و باکتری e.coli انجام گرفت و باند های مورد نظر توالی یابی شدند. آنالیز توالی های همسانه سازی شده توسط نرم افزار blastx انجام پذیرفت. توالی های مهم بدست آمده شامل ژن های هیستیدین کیناز (تنظیم کننده پاسخ دفاعی)، آنزیمgdp مانوز 3 و 5 اپیمراز، تیوردوکسین پراکسیداز، آنزیم gtpase، پروتئین کالترین، پروتئین خانوادهabc وکالنکسین بودند. به طور کلی توالی های بدست آمده در سه گروه ژنی شامل ژن های ساختاری، توالی های انتقال سیگنال و پروتئین های دفاعی گیاه طبقه بندی شدند.

هدف این تحقیق، ساخت میکروذرات کاتیونی شده طلا و به کارگیری آنها جهت افزایش انتقال ژن به سلول های گیاهی به روش زیست پرتابی است. سطح میکروذرات طلا با اندازه 1 میکرون در طی 2 مرحله کاتیونی شد. بدین منظور در مرحله اول، با ایجاد گروه های کربوکسیلیک بر روی سطح میکروذرات طلا از طریق تشکیل یک تک لایه ی خود آرا از ملکول 12-مرکاپتودودکانوئیک اسید (mdda) و در مرحله دوم، با ایجاد پیوند کووالانسی بین گروه های آمینی ملکول های پلی اتیلن ایمین (pei) و گروه های کربوکسیل mdda سطح میکروذرات طلا با گروه های آمینی ملکول های pei دارای بار مثبت شد. گروه های آمینی سطح میکروذرات طلا دارای قابلیت جذب الکتروستاتیک مولکول های dna که بار منفی قویی دارند، هستند. با استفاده از آنالیز طیف سنج فوتوالکترون پرتو ایکس ((xps، نشان داده شد میزان نیتروژن اتمی که نشانگر وجود گروه های آمینی بر روی سطح هستند از صفر درصد بر روی سطح اصلاح نشده به حدود 7/8 درصد اتمی بر روی سطح کاتیونی شده می رسد. اثر افزیش غلظت نمک در بافر بر میزان جذب dna بر روی ذرات کاتیونی شده نیز بررسی شد. نتایج نشان داد غلظت نمک باعث افزایش میزان جذب dna توسط میکروذرات کاتیونی شده از 37/0 به mg dna.g-1 au particles 87/0 می شود. در ادامه به منظور ارزیابی عملکرد میکروذرات کاتیونی شده طلا در انتقال ژن به سلولهای گیاهی، از سامانه ژن گزارشگر gus به منظور ارزیابی فعالیت ژن انتقال داده شده در کالوس های توتون تراریخته استفاده شد. شمارش تعداد نقطه های آبی حاصل از فعالیت ژن انتقال داده شده، نشان داد میزان انتقال ژن توسط میکروذرات کاتیونی به طور متوسط دو برابر بیشتر از آن توسط میکروذرات اصلاح نشده است. افزودن نمک با غلظت 5/0 مولار باعت شد انتقال ژن به طور متوسط تا سه برابر دیگر افزایش یابد. استفاده از روش ارائه شده می تواند گام موثری در افزایش کارایی بیان ژن های انتقال یافته و عملکرد گیاهان تراریخت حاصله از طریق زیست پرتابی محسوب گردد.

اسید فسفاتازهای ارغوانی(pap) (ec 3.1.3.2) آنزیم های متالوفسفواسترازی هستند که هیدرولیز پیوندهای استری فسفات را در گستره وسیعی از سوبستراها برعهده دارند. در ژنوم آرابیدوپسیس 29 جایگاه ژنی رمز کننده اسید فسفاتازهای ارغوانی شناسایی شده است. به لحاظ ساختاری pap های گیاهی به دو گروه، با وزن مولکولی بالا و پایین تقسیم می شوند. گروه اول به شکل همودایمر فعالند در حالی که گروه دوم که تنها دارای دامین متالوفسفاتاز هستند به شکل منومر فعالیت می کنند. در مقایسه با اسید فسفاتازهای ارغوانی با وزن مولکولی پایین اهمیت زیستی انتهای آمینی و دامین فیبرونکتین و همچنین ساختار دایمری موجود در اسید فسفاتازهای ارغوانی با وزن مولکولی بالا ناشناخته باقی مانده است. در این پژوهش عملکرد ژن های atpap18 و atpap9 با استفاده از روش های مختلف بررسی شده است. این دو ژن به ترتیب hmwو lmw بوده و بیان هر دو در شرایط فقدان فسفات القا شده و هر دو وارد مسیر ترشحی می شوند. بیان فراوان ژن atpap18 منجر به افزایش فعالیت اسید فسفاتازی، ذخایر فسفات و تولید مواد زیستی در گیاهان ترایخت توتون و آرابیدوپسیس گردید. بررسی استقرار سلولی پروتئین atpap18 با استفاده از بیان گذرای این ژن با سازه 35s::atpap18-gfp در سلول های بشره پیاز نشان دهنده استقرار آن در واکوئل و همچنین ترشح آن به خارج از سلول است. آزمایش مشابهی با تراریختی پایدار گیاهان آرابیدوپسیس و سازه 35s::atpap18-gus در محیط واجد فسفات انجام شد. نتایج نشان دهنده حضور رنگ آبی در سلول های تار کشنده و تریکوم و ترشح آن به مقدار زیاد به خارج از این سلول ها بود. در گیاهان آرابیدوپسیس تراریخت شده با سازه 35s::sp18-gus رنگ آبی در محیط واجد فسفات در ریشه ها و در محیط فاقد فسفات در اندام هوایی مشاهده شد. بیان پایدار ژن gfp با استفاده از سازه های 35s::atpap18-gfp و 35s::sp18-gfp در گیاهان آرابیدوپسیس نتایجی مشابه با سازه های دارای ژن gus را ایجاد نمود. همچنین در این پژوهش، وجود دو نسخه متفاوت رونویسی که توسط ژن atpap9 رمز می شود با بررسی لاین های t-dna تایید شد. الگوی بیان هر دو نسخه به طور جداگانه ارزیابی شد. تفاوت نسخه atpap9-2 با نسخه atpap9-1 فقط در انتهای 5 آن است که اهمیت آن مورد بررسی قرار گرفت. الگوی بیان atpap9-1 با اتصال پروموتر آن به ژن گزارشگر gus بررسی شد و نتایج نشان داد که این ژن ویژگی بیان بافتی دارد. نسخه atpap9-1 بیان بالایی در گوشوارک ها و بافت آوندی، به ویژه در پاسخ به آلودگی قارچی دارد. محل استقرار پروتئین atpap9-1 با اتصال آن به ژن gfp مورد بررسی قرار گرفت. نتایج نشان داد که این پروتئین در اتصال غشای پلاسمایی به دیواره سلولی درگیر است. این یافته ها همراه با طرح های ساختاری پروتئین atpap9-1 نشان می دهند که این پروتئین احتمالا یکی از اجزای مسیر پیام رسانی است.

گلایفوسیت[n-(phosphonomethyl) glycine] علف کشی غیر انتخابی است که بیشتر از 30 سال در مدیریت علف های هرز مورد استفاده قرار گرفته است. گلایفوسیت از فعالیت آنزیم epsps (5-enolpyruvylshikimate-3-phosphate synthase) که آنزیمی کلیدی در بیوسنتز اسیدهای آمینه حلقوی است ممانعت می کند. توالی بهینه شده ژن تجزیه کننده گلایفوسیت به نام گلایفوسیت اکسید ردوکتاز به صورت مصنوعی ساخته شده است و در تحقیق حاضر برای مطالعه فعالیت آنزیمی این ژن در حامل بیانی pet28a همسانه سازی گردید. در این تحقیق ابتدا پرایمرهای اختصاصی طراحی و با استفاده از تکنیک pcr قطعه مد نظر تکثیر شده و پس از استخراج قطعه از ژل محصول واکنش اتصال به باکتری e.coli سویه dh5? انتقال داده شد و پس از استخراج پلاسمید از باکتری های تراریخت، حضور قطعه مورد نظر در پلاسمیدها به وسیله هضم آنزیمی تأیید شد و پلاسمیدهای نوترکیب توالی یابی شدند. سپس بیان ژن مذکور در میزبان پروکاریوتی باکتری bl21 e. coli بهینه شد و با روش sds page مورد تایید قرار گرفت. نتایج نشان داد که بهترین شرایط برای بیان ژن مد نظر در سیستم pet، در حضورiptg یک میلی مولار، 6/0=od600، دمای 37 درجه سانتیگراد و 4 ساعت پس از انجام عمل القا، می باشد. به منظور بررسی فعالیت زیستی، باکتری های نوترکیب دارای synth-gox در محیط حداقل فاقد فسفات حاوی غلظت های مختلف گلایفوست کشت داده شدند. نتایج این تست نشان داد که باکتری طبیعی تا غلظت 5/0 میلی مولار گلایفوسیت توان زنده ماندن در محیط حداقل را دارد در صورتی که باکتری های حاوی ژن synth-goxتا غلظت 1 میلی مولار توان زیستن در این محیط را نشان دادند.

فناوری گیاهان ترانسپلاستومیک جایگاه مهمی در مطالعات علوم پایه و زیست فناوری دارد. دست ورزی ژنتیکی ژنوم پلاستیدی به ویژه ژنوم کلروپلاست، مزایای متعددی نظیر بیان بالا، توانائی بیان ژن های چندگانه و عدم انتقال ناخواسته ژن خارجی توسط دانه گرده را فراهم نموده است. با توجه به این ویژگی ها، علاقه زیادی برای به کارگیری این سیستم ها جهت مصارف کشاورزی، صنعتی و پزشکی وجود دارد. یکی ازکاربرد های این فناوری متحمل سازی گیاهان با ارزش زراعی به علف کش ها یی نظیر گلایفوسیت است. گلایفوسیت از جمله علف کش های غیر انتخابی است که از طریق غیر فعال کردن آنزیم 5- انول پیروویل شیکیمات 3- فسفات سنتاز(epsps) در مسیر شیکیمات مانع سنتز اسیدهای آمینه حلقوی ودرنهایت موجب مرگ گیاه می گردد. از مطالعات پیشین، ژن دست ورزی شده epsps که در ساختار آن دو جهش ایجاد شده و به گلایفوسیت تحمل نشان می دهد، موجود می باشد. در این طرح از ماهیت پروکاریوتی کلروپلاست و توانایی آن در بیان mrna های پلی سیسترونی به منظور تولید هم زمان چند پروتئین نوترکیب استفاده شد. از طریق تعبیه ی توالی داخلی اتصال ریبوزوم (internal ribosome entry site,ires)، ژن epsps جهش یافته ی باکتریایی و متحمل به گلایفوسیت در ناقل کلروپلاستی pkcz و در کنار ژن aada (ژن مقاومت به آنتی بیوتیک اسپکتینومایسین و استرپتومایسین) قرار گرفت. به این ترتیب یک ساختار اوپرونی و تحت کنترل پروموتر prrn16 ساخته شد.به منظور ارزیابی عملکرد mrna بلند حاصل در ترجمه پروتئین های مربوطه، دو سازه ژنی دی سیسترونیک تهیه شد. در یکی از سازه ها، ژن epsps در بالادست ژن aada همسانه سازی گردید و در دیگری در پایین دست آن قرار گرفت. تراریختی کلروپلاست ها با این دو سازه به روش زیست پرتابی و بر روی گیاه توتون انجام گرفت. به منظور دست یابی به گیاه تراریخت هموپلاسم، مراحل متعدد باززایی روی محیط انتخابی انجام شد. با آنالیزهای مولکولی بر روی گیاهان حاصل، حضور ژن های موجود در سازه در کلروپلاست این گیاهان مورد تأیید قرار گرفت. ارزیابی فنوتیپی گیاهان t0 با پاشیدن گلایفوسیت بر روی گیاهان تراریخت و گیاه تیپ وحشی به عنوان شاهد، انجام شد. نتایج حاصل، القا تحمل به علف کش تا سطح بیش از 0/2 میلی مولار را نشان داد که چهار برابر دوز کشنده برای نمونه غیر تراریخت است. برای به دست آوردن حد آستانه تحمل به گلایفوسیت در گیاه تراریخت لازم است غلظت های بالاتر علف کش بر روی گیاه اعمال گردد و تحمل گیاه ارزیابی شود.

متحمل سازی گیاهان زراعی نسبت به علف کش گلیفوسیت از طریق دست ورزی های ژنتیکی یکی از کاراترین روش های موجود در کنترل علف های هرز مزارع محسوب می شود. گلیفوسیت با مهار آنزیم epsps (5-انول پیرویل شیکیمات-3-فسفات سنتاز) در مسیر شیکیمات مانع سنتز اسید های آمینه حلقوی و در نتیجه مرگ گیاه می شود. برای توسعه گیاه با سطح تحمل قابل قبول در مقیاس تجاری، علاوه بر دست ورزی آنزیم epsps، به کار گیری ژن-های مربوط به آنزیم های تجزیه کننده گلیفوسیت نظیر gox (گلیفوسیت اکسیدورداکتاز) نیز ضروری می باشد. این آنزیم علف کش را به ترکیب آمینومتیل فسفونیک اسید (ampa) و گلی اکسالات که اثر کشندگی کمتری برای گیاه دارند تبدیل می کند. این ژن برای اولین بار از باکتری خاک زیochrobactrum antrophi سویه lbaa جدا شده است. در تحقیق حاضر، از خاک های باغات مناطق مختلف ایران با سابقه استفاده از علف کش گلیفوسیت نمونه برداری شده است و با روش های غنی سازی، باکتری هایی که قادر به رشد در محیط حاوی 3 میلی مولار گلیفوسیت به عنوان تنها منبع فسفات بودند، غربال شدند. مسیر تجزیه در باکتری مربوط به جنسochrobactrum با روش hplc مورد بررسی قرار گرفت و ترکیبampa به عنوان ماده حدواسط شناسایی شد. این باکتری می تواند کاندید مناسبی برای تجزیه زیستی گلیفوسیت نیز باشد. لذا، براساس توالی ژن gox ثبت شده در پایگاه اطلاعاتی ncbi، آغازگرهای اختصاصی طراحی گردید و تلاش شد تا با انجام واکنش زنجیره ای پلیمراز این ژن از باکتری های مذکور جداسازی گردد. با توجه به اینکه محصول تکثیر یافته پس از هم ردیفی با توالی ژن gox همسانی نداشت، لذا، ژن آن به طور مصنوعی ساخته شد. در این راستا، با کمک نرم افزارهای مختلف رایانه ای برای افزایش کارایی بیان ژن در گیاه، رمزهای ژن gox متناسب با گیاه brassica napus l. بهینه سازی گردید. همچنین درصد gc آن کاهش داده شد، عناصر تنظیمی منفی کاهش و توالی های مفید شامل کوزاک برای افزایش دقت ترجمه در آن تعبیه شد. ژن مصنوعی در ناقل بیانی گیاه (pbi121) همسانه سازی شد و برای تراریختی گیاهان کلزا در جهت ارزیابی اثر آن در مقاومت به گلیفوسیت به کار گرفته شد. پس از باززایی گیاهچه های تراریخت شده، نمونه ها در آزمایشگاه با روش کمی رقابتی زنجیره ای پلیمراز(qc-pcr) مورد بررسی قرار گرفتند و تعداد نسخه تراژن در 9 لاین مختلف تراریخت سنجیده شد. مقایسه نتایج بدست آمده با روش دورگه سازی سادرن در حدود 89 درصد شباهت را نشان داد و داده ها تنها برای یک لاین متفاوت بود. همچنین با روش کمی رقابتی rt-pcr، میزان بیان mrna در نه لاین مذکور اندازه گیری شد. نتایج بدست آمده نشان داد که لاین های 4، 7، 9 و 12بیشترین بیان را نشان دادند. در عین حال، بررسی فنوتیپی گیاهان t1 با پاشش گلیفوسیت بر روی گیاهان تراریخت و گیاه تیپ وحشی به عنوان شاهد، انجام شد. نتایج حاصل نشان دادند که گیاهان تراریخت، علف کش گلیفوسیت را تا سطح 5/1 میلی مولار تحمل می-نمایند. گرچه این میزان در حد محصولات تراریخت تجاری شده نیست، ولی بکارگیری این ژن در کنار ژن epsps مقاوم (با جهش های دوگانه) امکان ایجاد مقاومت در حد بالاتری را برای اهداف تجاری سازی کلزای تراریخت فراهم خواهد کرد.

تأثیر پاسخ های آگاهانه و احساسی به تبلیغات اینترنتی بر نگرش به وب سایت، برند و قصد خرید از موضوعات اصلی مورد بررسی در این تحقیق می باشند. مسأله اصلی این تحقیق آن است که تبلیغات مناسب اینترنتی چه واکنشی در کاربران ایجاد می کند. این واکنش ها که به دو نوع آگاهانه و احساسی تقسیم بندی می شوند چه تأثیری در شکل گیری نگرش مشتریان نسبت به آن وب سایت، برند تبلیغ شده و قصد خرید مشتریان خواهند داشت. جامعه آماری این تحقیق، مشتریان کالاهای الکترونیکی در مجتمع تجاری پایتخت می باشند. تحقیق حاضر استنتاجی از نوع توصیفی بوده که بصورت مقطعی صورت گرفته است. روش نمونه گیری بکار گرفته شده در این تحقیق، روش نمونه گیری چند مرحله ای است که در مرحله اول از نمونه گیری خوشه ای (احتمالی) استفاده شده است، اما در مرحله دوم از نمونه گیری در دسترس (غیر احتمالی) استفاده شده است. حجم نمونه با توجه به نا محدود بودن جامعه، با استفاده از فرمول کوکران، 384 نفر بدست آمده است. تعداد 435 عدد پرسشنامه در بین افراد جامعه توزیع شد که تعداد 388 پرسشنامه قابل قبول بود. مقیاس مورد استفاده در پرسشنامه، طیف 5 گزینه ای لیکرت است که عدد 1، بسیار مخالف و عدد 5 بسیار موافق را نشان می دهد. پس از جمع آوری داده ها با استفاده از آزمون آلفای کرونباخ به بررسی پایایی مدل تحقیق پرداختیم. سپس آزمون ks را برای سنجش نرمال بودن جامعه بکار بردیم. آزمون ضریب همبستگی رتبه ای اسپیرمن برای سنجش رابطه بین متغیرها مورد استفاده قرار گرفت. در پایان نیز با استفاده از آزمون رگرسیون به بررسی تأثیر متغیرهای مستقل بر متغیرهای وابسته پرداختیم. یافته ها نشان می دهند که پاسخ های آگاهانه و احساسی بر نگرش به وب سایت موثر هستند. پاسخ آگاهانه بر نگرش به برند موثر است. پاسخ احساسی بر قصد خرید اثرگذار است و در نهایت نگرش به برند بر قصد خرید موثر است. بنابر این پیشنهاد می شود که شرکت هایی که در عرصه تبلیغات اینترنتی فعالیت می نمایند، بررسی بیشتری بر روی واکنش های کاربران به تبلیغات اینترنتی داشته باشند و با تحلیل پاسخ های آنها به دنبال تقویت نگرش به برند و قصد خرید در مشتریان باشند. هم چنین با استفاده از برنامه ریزی بازاریابی به دنبال تقویت برند خود باشند و با ایجاد نگرش مثبت در مشتریان نسبت به برندشان، قصد خرید آنها را تقویت نمایند.

کیتین پس از سلولز بزرگترین منبع بیومس تجدید پذیر در طبیعت می باشد. این پلیمر در ساختار پوشش خارجی (exoskeleton) حشرات، سخت پوستان و دیواره سلولی برخی از قارچ ها وجود دارد. اولین و مهمترین مرحله در تجزیه طبیعی کیتین، ترشح آنزیم های کیتینازی است. کیتینازها اتصالات n-acetylglucosamine در پلیمر تشکیل دهنده زنجیرهای کیتین را هیدرولیز می کنند. در این تحقیق به منظور افزایش کارایی آنزیم کیتیناز42 (chit42)در تجزیه ساختارهای کیتینی موجود در دیواره سلولی قارچهای پاتوژن، دومین اتصال به کیتین (chitin binding domain) به انتهای کربوکسیلی آنزیم کیتیناز 42 متصل شده و فعالیت کیتینولیتیکی آنزیم هیبرید بیان شده مورد ارزیابی قرار گرفت. کیتیناز42 و کیتیناز کایمری فعالیت مشابهی علیه کیتین کلوئیدی داشته و ثابت اختصاص برای هر یک به ترتیب 83/0 و 07/1 بر دقیقه است. دما و ph بهینه برای هر دو تقریباً یکسان می باشد. در حضور کیتین کریستالی، کیتیناز کایمری فعالیت کیتینازی بیشتری (70 درصد) و هم چنین ثابت اتصال به کیتین در مقایسه با کیتیناز42 به طور قابل توجه بالاتر می باشد. مطالعات اسپکتروسکوپی نشان می دهد که تشکیل کایمر کیتیناز با تغییراتی در ساختار آنزیم همراه می باشد که باعث کاهش ساختارهای مارپیچ آلفا در ساختمان کیتیناز کایمری می شود. مطالعات پایداری دمایی نشان می دهد که کیتیناز کایمری نسبت به کیتیناز42 از لحاظ ساختاری پایدارتر می-باشد.. در این تحقیق به منظور انتقال ژن کیتیناز کایمری به گیاه نیشکر (sugarcane) و افزایش مقاومت آن علیه آفات و عوامل بیماریزای قارچی، ابتدا کشت بافت و انتقال ژن به این گیاه بهینه شد و تأثیر پارامترهای مختلف در کشت بافت و انتقال ژن به گیاه نیشکر دو واریته cp57 و nco310 به روش بمباران ذره ای مورد بررسی قرار گرفت. هم چنین، اثرات پارامترهای فیزیکی و بیولوژیکی مختلف مانند غلظت dna ، نوع محیط اسموتیک، نوع ذره، تعداد بمباران، فاصله ذرات پرتاب شونده از بافت هدف روی بیان موقت ژن gus ارزیابی شد. بدین منظور کالوس جنین زای حاصل از کشت ریز نمونه ساقه نیشکر در محیط ms حاوی هورمون 2,4-d توسط حامل های ژنی حاوی ژن uida تحت کنترل پروموترهای camv 35s, act1 و ubi بمباران شد. به منظور بررسی انتقال ژن از تعداد لکه های آبی ظاهر شده پس از رنگ آمیزی با ماده x-gluc استفاده شد. نتایج حاصل نشان داد که شرایط بهینه بیان ژن gus در کالوس جنین زای نیشکر در واریته cp57 شامل ژن تحت کنترل پروموتر ubi، بمباران با ذرات طلا یک میکرومتر پوشانده شده با یک میکروگرم dna و با فشار psi 1100 ، شش سانتی متر فاصله ذرات پرتاب شونده از بافت هدف و در محیط اسموتیک m 2/0 مانیتول و m 2/0 سوربیتول و در واریته nco310 شامل ژن تحت کنترل پروموترact1، بمباران با ذرات طلا یک میکرومتر با 5/12 میکروگرم dna و با فشار psi 1100 ، cm 9 فاصله ذرات پرتاب شونده از بافت هدف و در محیط اسموتیک m 2/0 مانیتول وm 2/0 سوربیتول هستند. از شرایط بهینه فوق برای انتقال ژن کیتیناز کایمری به گیاه نیشکر استفاده شد و ایجاد گیاهان تراریخت با روش های مولکولی تایید و مقاومت آن ها به قارچ های بیماریزا بررسی شد. نتایج حاصل نشان می دهد که مقاومت به عوامل بیماری زا در لاین های تراریخت نسبت به گیاه کنترل بیشتر می باشد. بدین ترتیب می توان با استفاده از ژن های مهندسی مقاوم به قارچ ها، قارچ های بیماری زای را کنترل نمود.

چکیده تراریختی کلروپلاست دارای پتانسیل مطلوبی برای بیان سطوح بالا و مقرون به صرفه پروتئین های نوترکیب در سلو ل های گیاهی است. باکتری اشریشاکلی سویه o157:h7 یکی از پاتوژن های مهم جانوری است که در انسان باعث بیماری اسهال خونی و در برخی از موارد منجر به بیماری مرگبار سندروم خونریزی در ادرار می-شود. شیوع این بیماری در سال های اخیر باعث افزایش تلاش هایی برای تولیدآنتی ژن های ایمنی زا مقرون به صرفه جهت مقابله با این باکتری شده است. پروتئین های espa، intimin وtir از فاکتور های بیماری زایی مهمی هستند که توسط مکان ژنی lee اشریشاکلی سویه o157:h7 بیان می شوند. در این مطالعه، ما فرض کردیم بیان سطوح بالایی از این پروتئین ها به صورت ترکیبی در کلروپلاست گیاه و کاربرد گیاهان ترانس-پلاستوم به عنوان واکسن خوراکی، می تواند سیستم ایمنی را تحریک و از اتصال باکتری به سلول روده و بیماری زایی آن ممانعت نماید. بنابراین پروتئین کایمریک espa: intimin: tir (eit) که کدون های آن برای میزبان پروکاریوتیک بهینه شده بود، در کلروپلاست از طریق تراریختی کلروپلاست بیان شد. گیاهان ترانس-پلاستوم فرضی با استفاده از روش pcr و دورگه سازی سادرن آنالیز شده و الحاق سازه ژنی حاوی eit در کلروپلاست و هموپلاست بودن گیاهان ترانس پلاستوم تایید شد. همچنین آنالیز های elisa و دورگه سازی وسترن ثابت کرد که پروتئین کایمریک eit در کلروپلاست بیان می شود و میزان بیان آن 4/1% کل پروتئین محلول برگ می باشد. در آزمایش های بررسی ایمنی زایی، موش هایی که با روش خوراکی با گیاهان ترانس-پلاستوم ایمن شده بودند، سطوح بالایی از پاسخ ایمنی(آنتی بادی های igg و iga) در سرم و مدفوع نشان دادند که دلیل بر ایمنوژن بودن آنتی ژن eit بیان شده در کلروپلاست گیاه می باشد. بعد از ایمنی زایی، مواجهه موش های ایمن و غیر ایمن با باکتری اشریشاکلی سویه o157:h7، نشان داد که در موش های ایمن تعداد باکتری های دفع شده از روز دوم بعد از چالش به تدریج کاهش می یابد؛ به طوریکه بعد از یک هفته از چالش تقریبا به صفر رسید. در حالی که، در موش های غیر ایمن تعداد باکتری دفع شده کاهش نیافت. نهایتا نتایج این تحقیق نشان داد که پروتئین eit بیان شده در کلروپلاست ، کاملا ایمنوژنیک بوده و دارای پتانسیل مناسبی برای توسعه یک آنتی ژن ایمنوژنیک خوراکی بر علیه باکتری اشریشاکلی سویه o157:h7 را دارد. کلمات کلیدی: ایمنی زایی، باکتری اشریشاکلی هموراژیک، بیان کلروپلاستی، پروتئین ترکیبی سه تایی

گندم از جمله غلات مهمی است که به عنوان غذای انسان و دام مورد استفاده قرار می گیرد. بیماری بلایت فوزاریومی سنبله گندم یا اسکب که عامل آن قارچ fusarium graminearum می باشد از بیماری-های مهم گندم و سایر غلات دانه ریز به خصوص در مناطق مرطوب و نیمه مرطوب می باشد. این بیماری در مرحله سنبله دهی گیاهان را آلوده می کند و خسارات اقتصادی زیادی به محصول وارد می کند. این بیماری علاوه بر تاثیر منفی بر روی رشد محصول، با تولید مایکوتوکسین های خطرناکی نظیر توکسین دی اکسی نیوالنول (don ) بر روی کیفیت دانه های تولیدی نیز اثرات منفی دارد. این توکسین یک بازدارنده سنتز پروتئین ها می باشد که خطراتی را برای سلامتی انسان و دام در پی دارد. ایجاد تغییر در ساختار توکسین don می تواند از تجمع این توکسین درون دانه بکاهد. ژن استیل ترانسفراز در مخمر (ayt1) آنزیمی را کد می کند که یک گروه استیل را به گروه هیدروکسیل c3 تریکوتسین ها اضافه می-نماید و از سمیت آن ها می کاهد. در این تحقیق بذور گندم تراریخته نسل دوم حاوی ژن ayt1 مخمری کشت و آنالیزهای مولکولی شامل pcr و rt-pcr برای اثبات حضور ژن مورد نظر در این گیاهان صورت پذیرفت. تعداد نسخ ژنی نیز از طریق آزمون دورگه سازی سادرن مشخص شد که این آنالیز ورود بیش از یک نسخه از ژن ayt1 را در سه لاین بررسی شده، نشان داد. همچنین آنالیز کروماتوگرافی لایه نازک، نشان دهنده فعالیت مناسب استیل ترانسفرازی ژن ayt1 در تعدادی از لاین های تراریخته بود. علاوه بر این، آزمون ارزیابی زیستی که در آن گیاهان تراریخته با قارچ عامل بیماری زا تیمار شدند نیز نشان از سم زدایی توکسین don و تحمل مناسب گیاهان تراریخته در برابر قارچ عامل بیماری داشت.

بیماری زنگ سیاه گندم با عامل puccinia graminis f.sp. tritici (pgt)از بیماری های مهم و مخرب این محصول در جهان و ایران می باشد. پیدایش نژاد ttksk (ug99) که برای ژن مقاومتsr31 بیماری-زایی دارد، تولید جهانی محصول گندم را در معرض خطر قرار داد. به منظور شناسایی نژادها، بررسی تنوع در جمعیت pgt و پراکنش این بیماری در کشور، بین سال های 1391- 1387 ردیابی بیماری با جمع آوری نمونه های آلوده از سطح مزارع گندم کشور صورت پذیرفت. تعداد 104 جدایه به کمک 20 لاین افتراقی زنگ سیاه بر اساس سیستم تعیین نژاد آمریکای شمالی نام گذاری شدند که در مجموع، از 38 نژاد شناسایی شده، چهار نژاد ttttc و tkttc (نژادهای غالب)، ttstc و ttksk ، 1/51% جمعیت pgt را به ترتیب با فراوانی های 1/24%، 6/11%، 7/7% و 7/7% به خود اختصاص دادند. نژاد مهاجم ttksk درنمونه های مناطق اهواز، دشت آزادگان و بروجرد مشاهده شد. تنوع ژنتیکی 63 جدایه به کمک نشانگر aflp با استفاده از شش ترکیب آغازگر از آغازگرهای psti و msei و دستگاهabi prism 3100/3100-avant مورد بررسی قرار گرفت. نتایج حاکی از عدم همبستگی معنی دار میان تنوع ژنتیک جدایه ها و توزیع جغرافیایی نژادها بود. تنوع ژنتیکی در بین افراد هر جمعیت زیاد (98%) و تنوع بین جمعیت ها پائین (2%) ارزیابی شد که فرضیه مهاجرت اسپورها بین مناطق پیشنهاد گردید. تنوع ژنوتیپی موجود در جمعیت خوزستان با 62/71% و جمعیت همدان با 71/31% به ترتیب بیشترین و کمترین بودند. ارتباط مشخصی بین گروه های انگشت نگاری حاصل از آزمایش aflp و بیماری زایی جدایه ها مشاهده نشد که بیانگر استقلال پلی مورفیسم دی.ان.ای از بیماری زایی بود. واکنش مقاومت 62 رقم تجاری گندم نان در مرحله گیاهچه ای نسبت به نژادهای غالب ttstc، ttttf، trtfc، ttksk، ttttc و tkttc و در مرحله گیاه کامل نسبت به نژادهای ttksk و tkttc مورد بررسی قرار گرفت. نتایج نشان داد که ارقام به وضوح دارای واکنش های متفاوتی نسبت به نژادها بودند. در مرحله گیاهچه ای، رقم دارای مقاومت نسبت به تمامی نژادهای مورد بررسی، شناسایی نگردید. اما در مرحله گیاه کامل، ارقام مروارید، گنبد، سیروان، پارسی، سیوند، کویر، بم، اکبری و مغان2 نمایشی از سطوح مختلف مقاومت در مزرعه را ارائه دادند. مطالعات تکمیلی برای بررسی حضور ژن های مقاومت sr2، sr22، sr24، sr25، sr26، sr31، sr36، sr39 و sr46 در 89 رقم تجاری و لاین پیشرفته گندم نشان داد که از بین ژن های مذکور، تنها ژن های مقاومت sr2 و sr31 به ترتیب با فراوانی های43% و 3/12% حضور داشتند. حضور ژن مقاومت sr25 نیز در یک لاین پیشرفته تایید شد.

چکیده: هدف پژوهش، بررسی نقش مقابله مذهبی، باورخودکار آمدی و حمایت اجتماعی با تاب آوری بیماران سرطانی بستری در بیمارستان امام علی (ع) زاهدان در سال 1392 می باشد. نوع مطالعه توصیفی- همبستگی است. جامعه آماری کلیه ی بیماران مبتلا به سرطان خون مراجعه کننده و تحت درمان در بیمارستان علی ابن ابیطالب(ع)زاهدان دربازه زمانی6ماهه ازدیماه 1391 تاتیرماه1392 که تعداد آنها حدود140 نفربودند، تشکیل شده است. متغیرها با استفاده از پرسشنامه های مقابله مذهبی افلاک سیر و جی. کلمن (2011)، خودکارآمدی شرر و آدامز(1982)، حمایت اجتماعی شربورن و استووارت(1991) و تاب آوری کونور و دیویدسون(2003) سنجیده شد. اطلاعات با استفاده از روشهای همبستگی پیرسون و رگرسیون گام به گام مورد تجزیه و تحلیل قرار گرفت. نتایج نشان داد مقابله مذهبی و خود کارآمدی و همچنین حمایت اجتماعی به ترتیب پیش بینی کننده های تاب آوری. باتوجه به نتایج استنباط می¬شود که با آموزش و مداخلاتی که شامل افزایش خودکارآمدی و مقابله مذهبی و حمایتهای مادی و معنوی اجتماعی می شود می¬توان تاب آوری بیماران مبتلا به سرطان خون را ارتقا بخشید. واژگان کلیدی: مقابله مذهبی، تاب آوری خودکار آمدی، حمایت اجتماعی، سرطان خون.

کپک سفید (sclerotinia sclerotiorum) یکی از بیماری های نکروتروفیک مهم گیاهی است که خسارت آن در بیش از ??? گونه گیاهی گزارش شده است. فاز اولیه آلودگی گیاهان توسط این پاتوژن از طریق الیسیتورها صورت می گیرد. مهم ترین الیسیتور این قارچ اگزالیک اسید می باشد. به منظور بررسی اثر الیسیتور اگزالیک اسید در بیان پروتئین ها و ژن های موثر در پاسخ گیاه به بیماری کپک سفید ناشی از s. sclerotiorum ، دو لاین نر عقیم مقاوم (tub) و حساس (sat1) آفتاب گردان (helianthus annuus) انتحاب شدند. الیسیتور اگزالیک اسید 20 میلی مولار با زمان های 2، 6، 12 و 24 ساعت به همراه تیمار کنترل (آب) به صورت آزمایشات فاکتوریل در قالب طرح کاملا تصادفی در مرحله دو کوتیلدونی به میزبان اعمال گردید. برگ های هر بوته به طور جداگانه در زمان های اعمال تیمار برداشت شد و یک برگ برای انجام آزمایشات پروتئومیکس و برگ دیگر برای آزمایشات آنالیز بیان کمی ژن ها مورد استفاده قرار گرفت. استخراج پروتئین به روش (tca) تغییر یافته انجام شد و آنالیز پروتئومیکس با استفاده از نوار های غیر خطی آکریل آمیدی آمرشام ((pi:3-10 صورت گرفت. لکه های افتراقی استاندارد شده معنی دار از طریق طیف سنجی جرمی (maldi tof tof)،شناسایی شد که بدون در نظر گرفتن پروتئین های ذخیره ای، 15% آنها را پروتئین های چرخه انرژی، 40% درصد آنزیم های اکسیدوردوکتاز و 30% درصد آنزیم های ترانسفرازی، لیازی و فاکتورهای رونویسی تشکیل می دادند. نفوذ اگزالیک اسید در لاین حساس پس از دو ساعت تیمار و در لاین مقاوم پس از شش ساعت مشاهده شد. مقاومت غشاء در لاین مقاوم مربوط به تخریب دیر هنگام غشا به خاطر فعالیت کم لیپوکسیژناز در لاین مقاوم نسبت به لاین حساس بود. پس از نفوذ اگزالیک اسید، آنزیم های آنتی اکسیدانت از جمله سوپر اکسید دیسموتاز، کاتالاز و اگزالات اکسیداز در لاین مقاوم به طور معنی دار بیشتر از لاین حساس فعالیت داشتند. اگزالیک اسید در هر دولاین مورد بررسی، ایزوسیترات سنتاز را در چرخه tca افزایش داده بود، در لاین حساس با فعال شدن ایزوسیترات لیاز و در نهایت مالات سنتاز مسیر گلی اکسیلات نیز فعال شده و میزان مالات را افزایش داده بود در صورتی که در لاین مقاوم چرخه tca فعال تر شده و مالات از طریق مالات دهیدروژناز افزایش یافته بود. این امر میتواند بیانگر این مطلب باشدکه تولید atp در لاین مقاوم بیشتر از لاین حساس بوده زیرا مقاومت در برابر الیسیتور قارچی یک استراتژی انرژی بر می باشد و رقم مقاوم با تولید انرژی توانسته مقاومت را تامین نماید. در صورتی که در لاین حساس کمبود atp به نظر میرسد به دلیل تغییر ایزوسیترات لیاز به گلی اکسیلات باشد. کمبود atp و بیان ژن hsr 203j نشان گر فعالیت فوق حساسیت و هدایت سلول ها به سوی مرگ برنامه ریزی شده سلولی در لاین حساس بوده چراکه قارچ نکروتروفیک کپک سفید در لاین های حساس از طریق افزایش مرگ برنامه ریزی شده سلولی باعث ایجاد آلودگی می گردد. علت انتخاب استراتژی مقاومت به قارچ های بیوتروف به جای قارچ نکروتروف عامل کپک سفید، مربوط به بیان ژن های فاکتور رونویسی wrky4 و wrky70 در لاین حساس بود که القاء کننده مسیر سالسیلیک اسید می باشند و در لاین مقاوم کاهش بیان فاکتوررونویسی wrky4 و wrky71، و افزایش بیان wrky33، wrky25 و wrky52 اتفاق افتاده است که مسیر جاسمونات و اتیلن را افزایش می دهد و القاء کننده مقاومت به قارچ های نکروتروف می باشد. بنابراین می توان گفت مقاومت به الیسیتور قارچ s. sclerotiorum در گیاه مقاوم، پلی ژنیک بوده که پروتئین ها و ژن های مختلفی ازجمله ژن ها و پروتئین های درگیر در مهار تخریب غشائی، چرخه انرژی و همچنین آنتی اکسیدانت ها در این مسیر نقش عمده ای را ایفا می نمایند و با تنظیم بیان ژن ها از طریق فاکتور رونویسی wrky، استراتژی مسیر جاسمونات و اتیلن را فعال می سازند و مانع مرگ برنامه ریزی شده سلولی می گردند. بنابرین به نظر میرسد با دستورزی بر روی ژن فاکتور رونویسی wrky، بتوان تنظیم بیان شبکه ای از ژن های مرتبط با سیستم مقاومت به قارچ s. sclerotiorum در گیاه آفتابگردان کنترل ودر غربالگری مورد استفاده قرار داد.

شابیزک (atropa belladonnal.)، گیاهی است علفی و چند ساله از تیر? solanaceaکه حاوی آلکالوئیدهایی به نام اسکوپولامین و آتروپین بوده که محرک اعصاب پاراسماتیک است. بیوسنتز تروپان الکالوئیدها مانند هیوسیامین و اسکوپولامین از پوترسین که یک پیش ماده مشترک برای پلی آمین ها مانند اسپرمیدین و اسپرمین و تروپان و پیریدین الکالوئیدها می باشد، آغاز می گردد. پوترسین n- متیل ترانسفراز (pmt)، n- متیلاسیون دی آمین را به شکل n- متیل پوترسین کاتالیز می کند و این اولین مرحله مشترک در بیوسنتز این دو نوع الکالوئید می باشد. در آخرین مرحله مسیر بیوسنتزی تروپان الکالوئیدها، هیوسیامین توسط آنزیم هیوسیامین 6-? هیدروکسیلاز (h6h)، به اسکوپولامین (هیوسین)، تبدیل می شود. متیل جاسمونات (mj) به عنوان یک القا کننده در القا متابولیت های ثانوی در کشت های سلولی گیاه بسیار موثر می باشد. لذا، در این تحقیق اثرات غلظت های مختلف متیل جاسمونات بر میزان تولید تروپان آلکالوئیدها و بیان ژن h6h و دو ایزوفرم pmt1 و pmt2، در مسیر بیوسنتز این تروپان آلکالوئیدها بررسی شد و همچنین اثرات غلظت های مختلف سالیسیلیک اسید، نیترات و فنیل آلانین بر بیان این ژن ها در ریشه های مویی و گیاهچه های شابیزک مورد بررسی و مقایسه قرارگرفت. متیل جاسمونات بیشترین اثر را بر میزان تولید آتروپین در اندام هوائی گیاهچه های تیمار یافته نشان داد و میزان بیان ژن h6h و ایزوفرم pmt2 در ریشه ها تحت تأ ثیر 01/0 میلی مولار متیل جاسمونات افزایش نشان داد. غلظت 35 میلی مولار نیترات بیان ژن h6h و ایزوفرم pmt2 ریشه مویین را به طور معنی داری افزایش داد. غلظت 01/0 میلی مولار سالیسیلیک اسید بیشترین تأثیر مثبت را بر بیان ژن h6h و ایزوفرم pmt2 داشت. فنیل الانین در غلظت 5/0 میلی مولار موجب افزایش بیان ژن h6h و ایزوفرم pmt2 گردید. در غلظت 15 میلی مولار نیترات، بیان h6h و pmt2 در ریشه افزایش یافت و بیشترین تأثیر تیمار سالیسیلیک اسید در غلظت 01/0 میلی مولار و اثر افزایش آن بر بیان pmt2 مشاهده شد. اما فنیل آلانین در هیچ کدام از غلظت های تعیین شده بر میزان هیچ کدام از ژن های تعیین شده در ریشه اثر افزایشی و یا کاهشی را نشان نداد. پس از بررسی اثر تیمار های نیترات، سالیسیلیک اسید و فنیل آلانین در اندام هوائی مشخص شد که ژن های مذکور به طور کلی در اندام هوائی شابیزک نسبت به بیان ژن توبولین (به عنوان کنترل داخلی) بیان کمتری دارند.

چکیده: با توجه به اهمیت غذایی کلزا(brassica napus l.) به عنوان یکی از مهمترین گیاهان تولید کننده روغن در جهان، امروزه بهینه سازی کاشت، داشت و برداشت این گیاه مورد توجه بسیار قرار گرفته است. حضور علف هرز در مزارع کلزا سبب کاهش قابل توجه محصول این گیاه می شود. علف کش گلیفوسیت به صورت وسیع الطیف و غیر انتخابی از طریق مهار رقابتی آنزیم کلیدی5-enolpyruvylshikimat-3-phosphate synthase یا epsps در مسیر شیکیمات، اثرات بازدارندگی خود را بر روی علف هرز و گیاه زراعی اعمال می کند. از راهکارهای موجود برای ایجاد مقاومت به علف کش گلایفوسیت استفاده از آنزیم های epsps جهش یافته و از جمله جهش زایی در جایگاه a183t و g96a می باشد. در عین حال از دیگر راه کارهای ایجاد کننده مقاومت به علف کش گلایفوسیت می توان به آنزیم گلایفوسیت اکسیدورداکتاز یا gox اشاره نمود که از طریق تجزیه گلایفوسیت به ترکیب بی اثر آمینومتیل فسفونیک اسید (ampa) و گلی اکسالات عمل می کند. در این تحقیق،کاست های ژنی epsps جهش دار و ژن goxهم به صورت مستقل و هم در کنار هم تحت کنترل پروموترcamv35s و پپتید نشانه کلروپلاستی در ناقل دوتایی pbi121 همسانه سازی شده و سپس از طریق agrobacterium tumefaciens سویه lba4404 به گیاه کلزا منتقل شدند. با توجه به نگرانی های موجود در مورد استفاده از انتخابگرهای آنتی بیوتیکی، به صورت همزمان از دو نوع ناقل دوتایی استفاده شد که یک نوع دارای ژن مقاوت به کاناماسین و دیگری فاقد این ژن بود. به همین منظور از گلایفوسیت به عنوان نشانگر انتخابی استفاده شد. آنالیز مولکولی لاین های تراریخت به دست آمده از طریق pcr و rt-pcr حاکی از تلفیق و بیان تراژن های مذکور بود. در عین حال، آزمون جوانه زنی بذور t1 روی محیط های حاوی غلظت های مختلف از گلایفوسیت بیانگر بروز مقاومت نسبی در لاین های بیان کننده دو کاست ژنی در مقایسه با لاین های تک ژنی بود. با توجه به نتایج حاصل از این تحقیق می توان استفاده هم زمان از دو مکانیسم بروز مقاومت به علف کش گلایفوسیت را جهت ارتقاء سطح مقاومت در گیاهان مهم واستراتژیک و به خصوص کلزا پیشنهاد داد.

اصطلاح علف هرز به هر گونه گیاهی که ناخواسته بوده و به طور مهاجم رشد کرده و گسترده می شود، اطلاق می¬گردد. از بین روش¬های مرسوم در کنترل علف¬های هرز، به نظر می¬رسد به کارگیری علف¬کش¬های وسیع¬الطیف، به دلیل کمک به حفظ خاک و صرفه جویی اقتصادی بهترین روش می¬باشند و از بین علف¬کش¬ها، آنهایی که با ممانعت از ساخت اسیدآمینه¬ها از تولید پروتئین جلوگیری می¬کنند مناسب¬ترند که از میان آنها می¬توان به گلیفوسیت با نام علمی (ان- فسفونومتیل گلیسین) اشاره کرد اما تاثیر منفی علف¬کش بر روی گیاه هدف، استفاده از آن را مشکل¬ساز نموده است؛ لذا استفاده از روش¬های کلاسیک و مبتنی بر مهندسی ژنتیک برای مقاوم نمودن گیاه به علف-کش ضروری است. گلیفوسیت از طریق ممانعت از عملکرد آنزیم epsps(5- انول پیرویل شیکیمات-3- فسفات سنتاز) در مسیر شیکیمات مانع تولید اسیدآمینه¬های آروماتیک می¬گردد. این آنزیم با ترکیب فسفو انول پیروات(pep) و شیکیمات تری فسفات (s3p) در مسیر شیکیمات، و با انتقال بخش انول پیروویل pep به s3p، تولید 5- انول پیروویل شیکیمات-3- ¬فسفات (epsp) و یک فسفات (pi) می¬نماید و در آخر مسیر، اسیدآمینه¬های آروماتیک تریپتوفان، فنیل¬آلانین و تیروزین ساخته می¬شود. به نظر می¬رسد همپوشانی زیادی بین جایگاه اتصال pep و گلیفوسیت در ساختمان آنزیم وجود دارد و گلیفوسیت برای اتصال به آنزیم با pep و نه باs3p رقابت می¬کند و مانع تولید اسیدآمینه¬های آروماتیک می¬گردد. در تحقیق حاضر با توجه به تحقیقات قبلی مربوط به جداسازی 34 باکتری از خاک¬های باغات مناطق مختلف ایران با سابقه استفاده از این علف¬کش که قادر به رشد در محیط حاوی 3 میلی¬مولار گلیفوسیت بوده و غربال شده¬اند، لذا در این تحقیق پس از غربال¬گری باکتری¬ها در حضور غلظت¬های بالای گلیفوسیت، 4 باکتری از مقاوم¬ترین آنها انتخاب و با انجام روش¬های بیوشیمیایی و مولکولی مانند بررسی 16s rrna، جنس باکتری¬ها شناسایی گردید. به دنبال آن پس از همردیفی ژن¬های epsps از باکتری های گزارش شده¬ مشابه در ncbi، با طراحی آغازگر از مناطق حفاظت شده¬ آنها، ژن epspsباکتری¬های مورد نظر جدا گردید.

تحقیق فوق به سه بخش تقسیم شده است. باززائی غیر مستقیم لیمو خارکی و لایم (ژنوتیپ جهرم و هرمزگان) از ریزنمونه-های گره و میان گره در محیط کشت پایه ms و mt حاوی 2 میلی گرم در لیتر 2,4-d، باززائی غیر مستقیم ریزنمونه اپی-کوتیل، برگ و برگ لپه ای در 13 محیط کشت با تیمار هورمونی مختلف و باززائی مستقیم ریزنمونه اپی کوتیل، برگ و برگ لپه ای در 12 محیط کشت با تیمار هورمونی مختلف. متاسفانه اولین آزمایش به جهت آلودگی باکتریایی درونی ریزنمونه ها در مرحله ی کال زائی متوقف گردید. در دومین آزمایش تیمار هورمونی 1 و 2 میلی گرم در لیتر 2,4-d و 1، 2 و 3 میلی گرم در لیتر 2,4-d با 1 میلی گرم در لیتر کینتین در ریزنمونه ها تولید کالوس نمودند. نتایج تجزیه واریانس اثر فاکتورهای ژنوتیپ، ریزنمونه و هورمون را بر درصد کال زائی معنی دار نشان داد. هم چنین دو نوع کالوس فشرده و پودری مشاهده شد.کالوس های تولید شده به دو تیمار نوری [روشنایی (شاخه زایی)، تاریکی (جنین زایی)] انتقال داده شدند. هشت هفته پس از کشت کالوس ها به محیط کشت جنین زائی و شاخه زائی هیچ گونه تغییری در کالوس ها مشاهده نگردید و تنها تعدادی از کالوس ها سبزرنگ شدند. در آزمایش سوم اثر معنی داری از هورمون و ریزنمونه بر شاخه زائی مشاهده شد.

بررسی ژن های موثر در ریشه زایی قلمه های زیتون می تواند راهگشای برنامه های کاربردی و اصلاحی قلمه های زیتون باشد. به گونه ایی که از این ژنها می توان به منظور غربال قلمه های زیتون در مراحل اولیه نونهالی به عنوان نشانگرهای مولکولی استفاده نمود.

چکیده خشخاش ایرانی با نام علمی papaver bracteatum از گونه های بومی ایران، دارای بیش از 100 آلکالوئید بنزیل ایزوکوئینولین مختلف است که برخی از آنها نظیر مرفین و کدئین به عنوان ضد درد، پاپاورین به عنوان شل کننده عضلات، نوسکاپین به عنوان داروی ضد تومور، سانگواینارین به عنوان ترکیب ضد میکروبی و تبائین که به عنوان ماده خام برای تولید داروهایی چون اکسی کدون، نالتروکسان و نالوکسان به کار می رود، از نظر پزشکی دارای اهمیت می باشند. از آنجا که این گیاه محتوی تبائین بالا و مورفین پائینی دارد، می تواند در جهت تولید بالاتر مورفین مورد دستکاری قرار گیرد. در این تحقیق سعی شده است تا یک روش موثر برای القای ریشه مویی تراریخت از این گیاه که دارای ژنهای نوترکیب در مسیر ساخت آلکالوئیدهای مورفینان ارائه شود. در ابتدا سازه های ژنی pbi121codr و pbi121sat حاوی دو ژن کدئینون ردوکتاز و سالوتاریدینول استیل ترانسفراز که از آنزیم های مهم در مسیر بیوسنتز تبائین و مورفین و کدئین می باشند به agrobacterium tumefaciens نژاد gv3101 منتقل و برای بیان موفت ژن به روش اگرواینفیلتریشن آماده گردید. بیان موقت این ژن ها، کارایی موثر سازه های یاد شده را در تنظیم مولکولی مسیر بیوسنتز آلکالوئیدهای مورفینان ثابت کرد. در مرحله بعد اثر نژادهای مختلف باکتری a. rhizogenes، lba9402, atcc15843, a13, a4, msu440 و نیز ریزنمونه های مختلف گیاهی در میزان فراوانی القای ریشه مویی بررسی گردید. از طرفی اثر ترکیبات عناصر ماکرو در محیط هم کشتی بررسی و بهینه سازی شد و بهترین محیط هم کشتی با کاهش نمک های ms معرفی گردید. همچنین برای معرفی بهترین محیط کشت مایع جهت رشد ریشه ها ی مویی از تغییرات در منبع کربن محیط و نسبت یون های nh4/no3 استفاده شد و بالاترین میزان تولید بیوماس در محیط حاوی نسبت 10:20 بدست آمد. استفاده از یک میلی گرم در لیتر آرژنین در محیط هم کشتی نیز سبب افزایش در فراوانی تراریختی گردید. سازه های ژنی pbi121codr و pbi121sat به نژادی از باکتری a. rhizogenes که بالاترین فراوانی القای ریشه مویی را داشت منتقل گردید. تراریختی با ریز نمونه های انتخاب شده (ساقه بریده شده) صورت گرفت و برای تایید ورود ژن ها در لاین های تراریخت ریشه مویی از pcr با آغازگرهای پیش رو camv 35s و معکوس ژن های مورد نظر و نیز آزمون دورگه سازی سادرن با کاوشگر اختصاصی استفاده شد. به منظور بررسی بیان ژن ها استخراج rna صورت گرفت و cdna تهیه گردید. با استفاده از multiplex rt-pcr نیمه کمی با آغازگرهای اختصاصی ژن ها و آغازگرهای ژن اکتین به عنوان کنترل داخلی نتایج ژل های الکتروفورز بدست آمده با نرم افزار total lab بررسی و افزایش بیان ژن ها تایید گردید. همچنین لاین های مختلف ریشه مویی ونمونه شاهد خشک و عصاره گیری با روش ریفلاکس با حلال صورت گرفت. در ادامه آزمون hplc با استفاده از استانداردهای مورفین و کدئین و تبائین برای بررسی میزان آلکالوئیدهای مورفینان انجام گردید و افزایش ترکیبات مورد نظر اثبات شد. نتایج حاصل از آنالیز داده های الکتروفورزی با استفاده از نرم افزار totallab کمی سنجی شد که نشان داد لاین های تراریخت شده با ژن codr نوترکیب 7 تا 10 برابر بیشتر از ریشه های مویی شاهد (فاقد ژن نوترکیب codr) دارای رونوشت مورد نظر می باشند. میزان مورفین و کدئین موجود در ریشه مویی های تراریخت شده با ژن codr ، به ترتیب 160 و 86 درصد نسبت به شاهد افزیش نشان می دهند. در مورد ریشه مویی های تراریخت شده با ژن salat میزان 107 تا 130 درصد افزایش در رونوشت ژن salat نسبت به ریشه طبیعی وجود داشت. لاین ریشه مویی تراریخت hrsalat1 ، 30 درصد تبائین بالاتری نسبت به ریشه مویی بدون ژن نوترکیب salat از خود نشان دادند.

چکیده ندارد.

بیماری بلایت فوزاریومی سنبله گندم که به وسیله قارچ fusarium graminearum ایجاد می شود, قادر است علاوه بر کاهش چشمگیر عملکرد, خسارت غیر مستقیمی را نیز از طریق تجمع مایکوتوکسین ها (تریکوتسین ها) در دانه های برداشت شده وارد سازد که محصول را برای تغذیه انسان و دام نامناسب می نماید. تریکوتسین ها (مانند don) ممانعت کنندگان سنتز پروتئین در یوکاریوت ها می باشند و ژن tri101 که یک 3- o- استیل ترانس فراز است به عنوان یکی از مکانیسم مقاومت مطرح می باشد. مطالعات گذشته نشان داده اند که بیان tri101 منجر به سرکوب حساسیت به don در گیاهان تراریخت شده است. ayt1 ژن همولوگ tri101 است که توانایی 3- o- استیلاسیون تریکوتسین ها را داراست و می تواند don را به فرم استیله که از سمیت پایین تری برخوردار است تبدیل کند. هدف اصلی این پژوهش ارزیابی مقاومت گیاه مدل توتون تراریخت با ayt1 به داکسی نیوالنول است. برای بررسی بیان تراژن مذکور, اپی توپ cmyc به ژن ayt1 افزوده شده و با استفاده از اگروباکتریوم به گیاه توتون انتقال داده شد. پس از تایید تراریختی گیاهان با سازه ژنی ayt1-cmyc با استفاده از آنالیزهای مولکولی, بررسی های ایمنوبلاتینگ و سرولوژیک در سطح پروتئین و همچنین فعالیت استیل ترانس فرازی بر روی تریکوتسین ها انجام شد. بیان و فعالیت ayt1 در پنج لاین تراریخت مشاهده شد. مکانیسم دیگری که در جهت کاهش تاثیرات don شناسایی شده, دست ورزی پروتئین هدف (rpl3) می باشد. در این پژوهش دو تغییر نقطه ای(اسید آمینه شماره 258 از تریپتوفان به سیستئین و شماره 259 از هیستیدین به تیروزین) در توالی cdna ژن rpl3 گوجه فرنگی با استفاده از تکنیک جهش زایی با جایگاه مشخص (sdm) انچام پذیرفت. گیاه مدل توتون تراریخت با اینlerpl3 cdnaی دست ورزی شده از نظر توانایی باززایی و تولید کالوس در حضور توکسین don مورد آزمایش قرار گرفت. تفاوتهای قابل توجهی از نظر توانایی تولید کالوس و باززایی در حضور donدر لاینهای تراریخت در مقایسه با شاهد غیرتراریخت مشاهده گردید. در بین جهش ها همانطور که انتظار می رفت مقاومت به donدر گیاهان حاوی جهش دوگانه بیش از سایرین بوده و در مقایسه بین جهش های منفرد, گیاهان حاوی lerpl3h259y پاسخ مقاومت بهتری از خود نشان دادند. این نتایج نشان می دهد که بیان پروتئین rpl3 دست ورزی شده می تواند در افزایش تحمل به don (و به دنبال آن مقاومت به fhb) موثر باشد.