نام پژوهشگر: محمد تقی طریحی
محسن عابدی محمد تقی طریحی
سلول های استرومایی مغز استخوان (bmscs) نوعی سلول های بنیادی بالغ با قدرت تمایز بالا هستند. bmscs می توانند به سلول هایی با منشأ مزودرمی و غیرمزودرمی تمایز پیدا کنند که با توجه به قابلیت دسترسی این سلول ها منبع مناسبی از سلول های بنیادی بالغ جهت تولید سلول های پایدار و سلول درمانی می باشند. در مطالعه حاضر این سلول ها با استفاده از ژن آنزیم سوپراکسید دیسموتاز1 انسانی ترانسفکت شدند و در ادامه میزان بیان پروتئین و همچنین میزان فعالیت آنزیم سنجیده شده است.پرایمرهای اختصاصی دارای توالی های آنزیمی hindiii و xhoi برای ژن hsod1 از پلاسمید pincy-hsod1 طراحی و تکثیر و تایید این ژن انجام شد. قطعه های تکثیر شده توسط pcr، در کلونینگ وکتور ترشحی psectag2/hygrob ساب کلون شدند و با روش های کلونی-pcr و هضم آنزیمی تایید گردیدند. در ادامه برای انجام کارهای سلولی تحت شرایط استریل سلولهای bmsc از استخوان ران موش های صحرایی بالغ استخراج شد.سپس با استفاده از روش های ایمنو سایتوشیمی وبا استفاده از آنتی بادی فیبرونکتین و cd45 ماهیت استرومایی این سلول ها تایید شد. برای انجام ترانسفکشن پاساژ سوم این سلول ها را با استفاده از معرف توربوفکت در معرض وکتور نوترکیب ساخته شده قرا می دهیم.با روش های rt-pcr و real time pcr به صورت کمی بیان ژن ارزیابی شد و در مرحله بعد با استفاده از آنتی بادی منوکلونال و اختصاصی انسانی بیان در سطح پروتئین با روش وسترن بلات انجام شد.در نهایت برای ارزیابی فعالیت آنزیمی با کمک کیت ارزیابی آنزیم sod فعایت آنزیم سنجیده شد که فعالیت آنزیمی 0.0402 به عنوان درصد مهار آنزیم، با توجه به دستورالعمل موجود در کیت حاصل شد. : با توجه به کاربرد متعدد سلول های بنیادی می توان با استفاده از ژن آنزیم سوپراکسید دیسموتاز1 انسانی که در تحقیقات بالینی کاربرد های مفیدی را برای آن ذکر کرده اند، سلول های پایداری که قابلیت تولید این آنزیم را داشته باشند تولید کرد. در این پژوهش سلول های پایدار مذکور تولید شده است که قابلیت استفاده در تحقیقات بالینی بعدی را دارد.