چکیده فارسی: مقدمه: ویبریو کلره عامل بیماری وبا در انسان می باشد. بیان فلاژله و تحرک آن، در کلونیزاسین و ویرولانس باکتری دخیل است. flaa یکی از پنج ژن کد کننده فلاژلین در این باکتری بوده که به عنوان فلاژلین اصلی در حرکت باکتری، سنتز و ایمنی زائی فلاژله مطرح می باشد. در این مطالعه بیان این پروتئین در باکتری اشرشیا کلی و تولید پروتئین نوترکیب مورد بررسی قرار می گیرد. هدف از این مطالعه تولید یک واکسن نوترکیب برای ویبریو کلره در آینده است. روش کار: ژن flaa با طراحی پرایمرهای اختصاصی وبا استفاده ازروش pcr ، تکثیر گردید. ژن flaa ابتدا در وکتور پلاسمید ptz57r/t و سپس در پلاسمید pgex4t-1 کلون و بیان گردید. پلاسمید حامل ژن flaa وارد اشریشیا کلی سویه bl21- de3 شد. تولید پروتئین با القا توسط iptg و بهینه سازی شرایط صورت گرفت. کیت g.s.t جهت خالص سازی پروتئین نوترکیب و تایید نهایی پروتئین نوترکیب با استفاده از آزمایش وسترن بلات انجام گرفت. میزان پروتئین ها با استفاده از روش براد فورد اندازه گیری شد. نتایج: نتایج این مطالعه بیان موفقیت آمیز پروتئین های نوترکیب را در دو سلول میزبان از سویه های اشرشیاکلی مانندe- coli bl21(dh3) plyss و e- coli bl21(dh3) ثابت کرد. ترادف نوکلئوتیدی ژن تکثیر شده توسط روش pcr با ژن flaa ویبریو کلره یکسان بود. تولید پروتئین نوترکیب flaa با القا پلاسمید flaa - pgex4t-1 توسطiptg انجام گردید. پروتئین های نوترکیب بوسیله کیت g.s.t تخلیص شدند . سرم موش واجد آنتی flaa در روش وسترن بلات با پروتئین تولید شده واکنش داد. الگوی واکنش این پروتئین ها با آنتی بادی های ضد آن ها ، نشان داد که این پروتئین ها خاصیت آنتی ژنیک دارند. بحث و نتیجه گیری: نتایج بدست آمده نشان داد که بیان پروتئین نو ترکیب flaa از میزبان اشریشیا کلی حامل این ژن امکان پذیر است و پروتئین های نوترکیب بدست آمده از فلاژلین ویبریو کلرا دارای خاصیت آنتیژنیسیته می باشد. پروتئین تولید شده خاصیت آنتی ژنیک خود را به خوبی حفظ می کند بنابراین این پروتئین نوترکیب می تواند به عنوان یک کاندید مناسب برای طراحی واکسن علیه این بیماری مورد استفاده قرار گیرد.

مقدمه:. سودوموناس آئروژینوزا یکی از رایج ترین عوامل عفونتهای بیمارستانی به حساب می آورند. در چند دهه اخیر مقاومت ذاتی واکتسابی آنتی بیوتیکی پسودوموناس آئروژینوزا کنترل عفونت با این سویه ها را مشکل کرد ه است .بیشتر آزمایشگاهها برای شناسایی پسودوموناس آئروژینوزا از روش کشت استفاده می کنند ولی روشی وقت گیر می باشد از طرفی دارای نتایج کاذب می باشد.در این تحقیق برای انجام روش pcr ما از دو نوع پرایمر اختصای بهره گرفته ایم وقصد داریم با مقایسه نتایج حاصل از pcr باستفاده از پرایمرهای منتشر شده در مقالات وپرایمرهای طراحی شده در این تحقیق به کمک آنالیز بیوانفرماتیک به نتایج دقیق تری دست یابیم .هدف از این تحقیق بررسی حساسیت pcr در تشخیص باکتری سودوموناس آئروژینوزا در نمونه های کلینیکی با استفاده از طراحی شده و پرایمر های منتشر شده در مقالات می باشد. . مواد وروش کار:در این تحقیق 150نمونه کلینیکی جمع شده وpcr با هدف سه ژن بسیار اختصاصی این باکتری به نام های ژن ,exoa oprl و algd انجام گرفت .برای جداسازی کروموزم باکتری از نمونه های بیماران از کیت invitec,germany)) استفاده شد.dna استخراج شده در دمای c 20- نگهداری شدند. با کمک روش آنالیز بیوانفورماتیکی برای نواحی بسیارثابت ژنهای فوق پرایمرهای اختصاصی طراحی شد . بااستفاده ازپرایمرهای طراحی شده وپرایمرهای منتشرشده درمقالات نمونه هااز نظر وجود پسودوموناس آئروژینوزا مورد ارزیابی به روش pcr قرار گرفت. نتایج: در این مطالعه حساسیت و اختصاصیت واکنش pcr با استفاده از پرایمرهای طراحی شده ومنتشر شده در مقالات مورد بررسی وارزیابی قرار گرفت 70 سویه سودوموناس آئروژینوزادرکشت نمونه هاجداشد .با بهره گیری از پرایمرهای ژنsrna16 تمام 70 نمونه کشت مثبت نتایج یکسانی داشتند در حالیکه با بکارگیری پرایمرهای طراحی شده نتایج مثبتpcrبه ترتیب برا ی ژنهایexoa،oprlوalgdدر 67 ، 70 و69 نمونه بدست امدکه بترتیب 96.15 , 100و98.6 ?دارای حساسیت میباشد . درصورتیکه باپرایمرهای منتشرشده نتایج مثبت به ترتیب برا ی ژنهای فوق در57، 49 و 28 نمونه بدست امدکه بترتیب5/81 ?، 70? و 40? دارای حساسیت میباشد.برای نشان دادن اختصاصیت واکنش pcr تمام 150 نمونه بیمار با کمک دو نوع پرایمر واکنش pcr با هدف سه ژن فوق انجام گرفت اختصاصیت واکنش با پرایمرهای طراحی شده 100%بود یعنی تمام نمونه های کشت منفی با روش pcr هم منفی بودند.درحالیکه با کمک پرایمرهای منتشر شده در مقالات سه نمونه بیمار که کشت منفی داشتند pcr برروی ژن alg وopr مثبت گزارش گردید در واقع اختصاصیت واکنش با پرایمرهای منتشر شده 94.2 گزارش گردیده است. نتیجه گیری: در این بررسی دو نوع پرایمر و سه ژن حفاظت شده پسودوموناس آئروژینوزا برای تشخیص به روش pcr مورد استفاده قرار گرفت و نتایج مورد ارزیابی قرار گرفت.نتایج این تحقیق نشان دادکه بابکارگیری پرایمرهای اختصاصی مناسب درتکنیکpcrمعمولی میتوان باحساسیت وویژگی بسیاربالاکلونیزاسیون سودوموناس آئروژینوزارادربیماران حساس مثل سیستیک فیبروزیس خیلی زودترازمثبت شد ن کشت نشان داد.