نام پژوهشگر: رضا مجیدزاده هروی

بررسی امکان تولید پروبیوتیک نوترکیب با قابلیت تجزیه فیتات جیره های طیور گوشتی
پایان نامه وزارت علوم، تحقیقات و فناوری - دانشگاه فردوسی مشهد - دانشکده کشاورزی 1390
  رضا مجیدزاده هروی   حسن کرمانشاهی

در این مطالعه امکان تهیه پروبیوتیکی نوترکیب با قابلیت تجزیه فیتات گیاهی جهت کاربرد در تغذیه طیور بررسی گردید. فلور میکروبی 12 جوجه گوشتی در سنین مختلف (15 ، 30 و 40 روزگی) در شرایط استریل جدا و لاکتوباسیل های فلور هر بخش از دستگاه گوارش با کشت در محیط mrs تفکیک شد و پس از آزمایشات مورفولوژیکی و تایید گرم مثبت بودن، باکتری ها به روش سکانس ناحیه s16 ریبوزومی dna در سطح گونه شناسایی شدند. سویه ها در هر گونه بر اساس تجزیه روابط فیلوژنی تعیین شدند. بر اساس زمان کوتاه اتو-اگریگیشن 8 سویه انتخاب و تحت آزمایشات پروبیوتیکی قرار گرفتند. فعالیت ضدباکتریایی، مقاومت به اسیدیته، مقاومت به صفرا، چسبندگی و آبگریزی و تولید پراکسید ئیدروژن معیارهایی بودند که بررسی شدند. بر این اساس دو سویه لاکتوباسیلوس سالیواروس c4 و لاکتوباسیلوس کریسپاتوس cacae10 که امتیاز کلی بالاتری در معیارهای تحت بررسی داشتند به عنوان سویه پروبیوتیکی معرفی شدند. لاکتوباسیلوس سالیواروس c4 به همراه یک سویه پروبیوتیک تجاری لاکتوکوکوس لاکتیس تحت انتقال ژن فیتاز (appa) قرار گرفتند. ژن appa از ایکولای bl21 de3 جداسازی گردید و پس از جایگزینی در پلاسمید pbu003 برای تکثیر به ایکولای mc1061 منتقل گردید. پلاسمید حاوی ژن appa به باکتری های لاکتوباسیلوس سالیواروس c4 و لاکتوکوکوس لاکتیس الکتروترانسفرم شد. انتقال ژن در لاکتوباسیل سالیواروس c4 احتمالا به دلیل ناپایداری پلاسمید موفق نبود و در 5 نسل، رشد باکتری در محیط حاوی آنتی بیوتیک به کمتر از 1 درصد رسید. ولی در لاکتوکوکوس لاکتیس پلاسمید درطی 15 نسل کل دوره آزمایش پایدار بود. ترجمه معکوس rna اختصاصی بیان ژن در لاکتوکوکوس را تایید کرد. زیموگرام در ژل آکریلامید باند پروتئینی دارای فعالیت آنزیمی را مشخص نمود و پروتئینی با وزن مولکولی kda5/46 در عصاره سلولی باکتری تعیین شد. فعالیت آنزیم فیتاز داخل سلولی برابر با u/mg60 اندازه گیری شد. فعالیت فیتازی لاکتوکوکوس نوترکیب در محیط کشت جامد نیز تعیین گردید. جهت تایید کارآیی باکتری در تجزیه فیتات گیاهی در محیط دستگاه گوارش نیاز به آزمایشات درون تنی می باشد.