نام پژوهشگر: سیروس زنیلی
عبدالحسین رضاییان سیروس زنیلی
هدف از این تحقیق مهیا کردن بعضی از تکنیک ها برای دستکاری جنین های موش و هویت یابی آنها به منظور شروع فعالیت ترانسژنیک در کشورمان بود. اسپرم ها و اووسیت ها از موش های cxbfi(c57bl/6*balb/c) که به وسیله برنامه های اصلاحی حیوان تولید شده بودند، استخراج گردیدند. جنین های مرحله دو سلولی حاصل از باروری آزمایشگاهی (ivf)، بدرون اویدوکت موشهای ماده آبستن کاذب balb/c به روش zift انتقال یافتند. قبلا این موش های دایه بوسیله نرهای وازکتومی شده و استریل (c57bl/6) القا شده بودند. نتایج حاصل به کمک استخراج dna از دم هایشان و تجزیه و تحلیل واکنش زنجیره ای پلی مراز (pcr) با استفاده از مارکرهای میکروساتلایت که در نقشه برداری سریع سازماندهی ژنوم خیلی مفید هستند، هویت یابی گردیدند. لوکوس های تکراری توالی کوتاه (strs) قرار گرفته شده در ژن tnf، ناحیه mhc و در لوکس cypla2 مورد استفاده قرار رگفتند و نمونه ها به روش رنگ آمیزی نقره ردیابی گردیدند. این شیوه، تجزیه و تحلیل غیر ایزوتوپی و ارزان را برای هویت یابی dna آماده می سازد. امروزه از بین پستانداران، موش با کاربرد بالقوه زیاد خود، برای تحقیق گسترده در تنظیمات ژنی بافت خاص و مرحله توسعه ای ویژه و همچنین برای آزمایش های مربوطه به اثرات فنوتیپی بیان ترانسژن انتخاب گردیده است. چون زمینه ژنتیکی حیوان موردنظر در این آزمایش مشکل ساز بود، اغلب تیمارها با زیاگوت های هیبرید f2 که حاصل تلاقی بین موش های ماده و نر هیبرید cxbf1 بودند، انجام شدند. ivf در این مطالعه برای آماده سازی بستر انتقال ژن مهندسی شده با میانجیگری اسپرم، بجای باروری در زیوه و متعاقب آن بازیافت جنین، صورت پذیرفت. تقریبا 60 درصد از 180 تخمک مانا با شهود دو پرو-نوکلئوس بارور گردیدند و 13 درصد از این جنین ها در هر موش به درون رحم مادری های آبستن کاذب جایگزین شدند. این نتایج حاصل و ردیابی مولکولی دقیق آنها بوسیله str های بالا، تکنیک های بکار رفته را تایید کردند.