یک روش اسپکتروفتومتری دقیق، سریع و آسان برای اندازه گیری آمپی سیلین، آموکسی سیلین و سفازولین در فرم خالص و نمونه های دارویی ارائه شده است. این روش بر اساس تشکیل کمپلکس آبی پروس بوده و واکنش مورد نظر برای اندازه گیری اسپکتروفتومتری پنی سیلین ها با استفاده از ‏‎fe3+‎‏ و هگزاسیانوفرات ‏‎(iii)‎‏ به عنوان عوامل رنگزا مورد ارزیابی قرار گرفته اس. در این روش افزایش مقدار زیادی از آنیون کمپلکس دهنده مانع از تشکیل رسوب آبی پروس ‏‎fe4[fe(cn)6]3)‎‏) شده و در نتیجه یک محلول آبی پر رنگ ‏‎( max=700-730nm)‎‏ در اثر کاهش ‏‎fe+3‎‏ به ‏‎fe+2‎‏ توسط پنی سیلین ها در محیط اسیدی و در درجه حرارت 65 درجه سانتی گراد حاصل می گردد. اثر عوامل مختلفی نظیر غلظت ‏‎k3[fe(cn)6], fe+3‎‏، نوع و غلظت اسید، درجه حرارت و زمان حرارت دادن، بررسی شده، بطوریکه تحت شرایط بهینه، محدوده خطی منحنی معیارگیری برای آمپی سیلین ‏‎2-12 g/ml‎‏، آموکسی سیلین ‏‎5-13/5 g/ml‎‏ و سفازولین ‏‎3-12 g/ml‎‏ تعیین گردیده است. انحراف استاندارد نسبی برای اندازه گیری ‏‎5 g/ml‎‏ از پنی سیلین ها در حدود 5/1-1% می باشد.روش پیشنهادی بطور موفقیت آمیزی برای اندازه گیری آمپی سیلین، آموکسی سیلین و سفازولین در نمونه خالص و اشکال دارویی نظیر قرص و سوسپانسیون خوراکی و کپسول بکار گرفته شده است. تطابق بسیار خوبی ا کاربرد روش های استاندارد و روش پیشنهادی در اندازه گیری پنی سیلین در نمونه های دارویی، نشان دهنده عدم مزاحمت افزودنی های مجازی است که در اشکال دارویی بکار گرفته میشود.هر کدام از سه داروی آنتی بیوتیک کم محلول در آب، آمپی سیلین، آموکسی سیلین و سفالکسین در محلول مایسلی ‏‎-n‎‏ هگزادسیل، ‏‎n‎‏ و ‏‎n‎‏ و ‏‎-n‎‏ تری متیل آمونیوم بروماید ‏‎(ctab)‎‏ حل شده و با محلولی از ‏‎naoh‎‏ استاندارد شده عاری از کربنات به غلظت ‏‎0/025 m‎‏ تیتر شده است. از روش پتانسیومتری برای تشخیص نقطه پایان تیتراسیون استفاده شده است. مقادیر ‏‎pka‎‏های داروهای آنتی بیوتیک در حضور ‏‎ctab‎‏ به روش پتانسیومتری محاسبه شده و با مقادیر حاصل از داروها در عدم حضور ‏‎ctab‎‏ مقایسه گردیده اند. شرایط تیتراسیون ‏‎-ph‎‏ متری داروهای آنتی بیوتیک با استفاده از محلول استاندارد ‏‎naoh‎‏ بهینه شده و برای اندازه گیری آنها در فرم خالص و فراورده های دارویی مختلف بکار گرفته شده است. انحراف استاندارد روش برای اندازه گیری 25 میلی گرم از آنتی بیوتیک های حدود 2%-1% بوده است. روش پیشنهادی بسیار ساده، ارزان و دقیق بوده و میتواند جایگزین روشهای انجام شده در حلالهای ناآبی گردد.