نام پژوهشگر: ابوالفضل بایرامی

تمایز سلولهای مشابه جرم در طی هم کشتی سلولهای بنیادی مزانشیمی استخراج شده از ژله وارتون بند ناف بر روی لایه تغدیه کننده سرتولی و تحت القای دوزهای مختلف رتینوئیک اسید و bmp4 درآزمایشگاه
پایان نامه وزارت علوم، تحقیقات و فناوری - دانشگاه محقق اردبیلی - دانشکده علوم پایه 1393
  رقیه سادات فائم مقامی   ابوالفضل بایرامی

با افزایش میزان بقا به دنبال درمان سرطان، باروری مردان محدود شده است چرا که درمان های ضد سرطان به میزان زیادی سلول های جرم را از بین می برد. از این رو یافتن راهی برای تمایز این سلول ها از منابع سلولی دیگر و نگهداری آن ها در محیط کشت و تکثیر آن ها می تواند زمینه ای برای ظهور اسپرماتوزنز در شرایط in vitroفراهم کند که به عنوان یک استراتژی برای درمان ناباروری حایز اهمیت است. بر پایه مطالعات گذشته سلول های سوماتیکی سرتولی در تمایز سلول های جرم تأثیر به سزایی دارند. این سلول ها باعث تغذیه و حفاظت بیشتر سلول های جرم شده و فاکتور های رشدی لازم جهت تمایز این سلول ها را فراهم می کند. به منظور تشخیص سلول های جرم در محیط کشت از شاخص هایی که درgerm-like cell ها به طور اختصاصی بیان می گردد استفاده می شود. در مطالعه حاضر ابتدا سلول های بنیادی مزانشیمی (msc) از بافت ژله وارتون بند ناف مذکر جدا سازی شده و سپس به روش تکه بافتی کشت می شوند. سلول های حاصل به محیط کشت dmemبا گلوکز بالا و ده درصد سرم گوساله منتقل شده و به مدت 11-7 روز به حال خود رها می شوند. هر دو روز یک بار محیط کشت آن ها تعویض می شود. پس از مشاهده80-70 درصد فشردگی سلولی در محیط پاساز سلولی انجام می گیرد. برای اطمینان از خاصیت چند توانی سلول های mscبیان مارکرهای cd105وcd44 وcd34 ، مورد بررسی قرار گرفت. سلول های mscپس از پاساژ چهارم بر روی بستر سلول های سرتولی به عنوان لایه تغذیه کننده و تولید کننده فاکتور های تمایزی و نیز دوزهای مختلف bmp4 ) 5 و 5/0 نانوگرم ) و رتینوئیک اسید (m5-10وm 6-10 قرار می گیرند. تمایز سلول های mscبه سلول های مشابه جرم با بررسی بیان ترانسکریپت های prm1،stra8،oct4 ، plzf از طریق rt-pcr در طی روز های مختلف کشتی اثبات خواهد شد .نتایج نشان داد دوزm 6-10 رتینوئیک اسید بیشترین خاصیت القایی را در تولید سلول های مشابه جرم از سلول های بنیادی مزانشیمال بند ناف دارد. به طوری که در این شرایط سلول هایی مشابه اسپرماتوگونی تولید شدند. با توجه به بیان مثبت prm1 اثبات شد که این سلول ها از مرز تقسیمات میوزی که خاص سلول های جرم می باشد گذشتند و سلول های هاپلوئیدی تولید نمودند. در صورت موفقیت در تولید این سلول ها بافت ژله وارتون بند ناف به عنوان منبعی جهت تولید سلول زایا برای افراد مذکر نابارور معرفی می شود که می تواند جهت تولید اسپرم مورد استفاده قرار گیرد

تمایز سلولهای بنیادی مزانشیمی ژله وارتون بندناف به سلولهای مشابه جرم در شرایط آزمایشگاه تحت تاثیر دوزهای مختلف bmp4
پایان نامه وزارت علوم، تحقیقات و فناوری - دانشگاه محقق اردبیلی - دانشکده علوم پایه 1393
  زینب عبدالهی   طوبا میرزاپور

سلول¬های زایای بدوی مسئول ادامه و تکامل گونه می¬باشند. از این رو ایجاد راهی برای تمایز و استخراج سلول-های زایا از منابع سلولی مختلف در محیط کشت، روشی با ارزش جهت انجام تحقیقات، ارزیابی مسائل اپی¬ژنتیک و درمان ناباروری می¬باشد. مهم¬ترین قسمت در تمایز یک سلول خاص، شامل تشخیص و خالص¬سازی سلول¬های بنیادی قبل از تمایز می¬باشد. لذا در این مطالعه به لحاظ مولکولی بنیادینگی سلول¬های مزانشیمی ژله وارتون با بیان ژن¬های بنیادی, cd105 cd44و cd34بررسی شد. ژن¬¬های actin,cd105،cd44 را قبل از تمایز بیان، ولی بیان ژن cd34 در آن مشاهده نشد. به منظور بررسی تکثیر و تمایز سلول¬های بنیادی بر روی نانوداربست پلیمری، نانوداربست پلیمری plla از لحاظ مناسب بودن خصوصیات سطحی، اندازه ی منافذ و نحوه¬ی توزیع منافذ، با آنالیز عکس semتوسط نرم¬افزارimage j مورد بررسی قرار گرفت. سلول¬های بنیادی مزانشیمی برروی این داربست کشت داده شدند.به منظور بررسی توان تمایزی این سلول¬ها در سطح داربست، به مدت 15روز تحت تیمار با دوزهای مختلف bmp4 قرار گرفت و روند تمایز با بررسی ژن¬های تمایزی طی روزهای 10 و 15 توسط rt-pcr مورد بررسی قرار گرفت. علاوه بر این، جهت بررسی مورفولوژی سلول¬های تمایزیافته بر روی نانوداربست، تصاویر میکروسکوپ الکترونی تهیه گردید. نتایج نشان داد کشت سلولها بر روی بستر نانوفایبر plla و دوز ng/ml bmp4 5 بیشترین خاصیت القایی را در تولید سلولهای مشابه جرم از سلولهای بنیادی مزانشیمال بند ناف دارد. به طوریکه در این شرایط سلولهایی مشابه اسپرماتوگونی تولید شدند. با توجه به بیان مثبت stra-8 پس از گذشت 15 روز از کشت اثبات شد که این سلولها درست در مرحله قبل از انجام تقسیمات میوزی که خاص سلولهای جرم می باشد هستند. طولانی¬تر کردن زمان کشت شاید به گذر سلولها از مرحله میوز منجر شود. . انجام آزمایشات تکمیلی برای اثبات دقیق تر این سلولها و بررسی dna این سلول¬ها از نظر وجود نقص های احتمالی درآینده توصیه می شود. در صورت موفقیت در تولید این سلول¬ها بافت ژله وارتون بند ناف به عنوان منبعی جهت تولید سلول زایا برای افراد مذکر نابارور معرفی می¬شود

تأثیر دوزهای مختلف اسید رتینوئیک بر تمایز سلول های مزانشیمی ژله ی وارتون بندناف به سلول های مشابه جرم در شرایط آزمایشگاه
پایان نامه وزارت علوم، تحقیقات و فناوری - دانشگاه محقق اردبیلی - دانشکده علوم 1393
  نسیم نجف زاده   ابوالفضل بایرامی

سلول های زایای بدوی در شرایط درون بدن از سلول های اپی بلاست ایجاد می شوند. این سلول ها سرآغاز فرآیندی هستند که طی آن اطلاعات ژنتیکی به فرزندان نسل بعدی فرد منتقل می شود. مطالعات پیشین نشان می دهند که سلول های زایای زنانه و مردانه می توانند از سلول های بنیادی جنینی، مغز استخوان، پانکراس، سلول های بنیادی که از برجستگی های جفت استخراج می شود و نیز از بندناف به وجود آیند. از این رو ایجاد راهی جهت تمایز و استخراج سلول های زایا از منابع سلولی مختلف در محیط کشت روشی با ارزش جهت انجام تحقیقات و درمان ناباروری می باشد. در این تحقیق ابتدا سلول های بنیادی مزانشیمی از بافت ژله ی وارتون بند ناف جنین مذکر به روش کشت قطعه ی بافت جداسازی شدند. برای اثبات بنیادینگی سلول های مذکور بیان مارکرهای cd44، cd105، cd34 مورد بررسی قرار گرفت. که بیان دو مارکر سطحی cd44 و cd105 و عدم بیان مارکر هماتوپوئتیک cd34 گویای مزانشیمی بودن این سلول ها بود. درصد بقا و میزان کلنی زایی سلول ها نیز محاسبه گردید. نتایج نشان دهنده ی افزایش میزان بقای سلول ها در پاساژهای بالاتر بود. میزان کلنی زایی سلول ها نیز بسته به تعداد سلول های زنده تغییر می کرد. سلول های msc پس از پاساژ چهارم در معرض conditioned medium و نیز دوزهای مختلف رتینوئیک اسید (4-10و 5-10و 6-10مولار) قرار گرفتند. با توجه به مطالعات پیشین و نقش مثبت داربست های نانوفایبر در نگهداری و تکثیر سلول های جرم از داربست کایتوزان برای حفظ محیط داخلی سلول ها استفاده شد. در بررسی موروفولوژیکی سلول ها توسط میکروسکوپ الکترونی نگاره و میکروسکوپ فاز معکوس سلول های القا شده، مانند دوک های باریک به نظر می رسیدند. در بررسی مولکولی بیان ترانسکریپت های oct-4، stra-8، plzf و prm1 (مارکرهای ویژه ی سلول های زایا) از طریق تکنیک rt-pcr در طی روزهای 10 و 15 تمایز مورد مطالعه قرار گرفت. نتایج نشان داد دوز 6- 10 مولار رتینوئیک اسید در حضور نانوفایبر کایتوزان بیشترین خاصیت القایی را در تولید سلول های مشابه جرم از سلول های بنیادی مزانشیمال بندناف دارد. به طوریکه در این شرایط سلول هایی مشابه اسپرماتوسیت تولید شدند. این گروه از سلول ها در روز 15 تمایز مارکرهای ویژه ی سلول های زایا (oct-4، stra-8، plzf) را بیان داشتند. انجام آزمایشات تکمیلی برای اثبات دقیق تر این سلول ها و بررسی dna این سلول ها از نظر وجود نقص های احتمالی درآینده توصیه می شود. در صورت موفقیت در تولید این سلول ها بافت ژله ی وارتون بندناف به عنوان منبعی جهت تولید سلول زایا برای افراد مذکر نابارور معرفی می شود که می تواند جهت تولید اسپرم مورد استفاده قرار گیرد.

مطالعه تنظیم یونی و فشار اسمزی ‏‎mnemiopsis leidyi‎‏
پایان نامه وزارت علوم، تحقیقات و فناوری - دانشگاه تربیت مدرس 1381
  ابوالفضل بایرامی   بهروز ابطحی

به منظور بررسی تنظیم یونی و اسمزی گونه شانه دار مهاجم دریای خزر ، به مقدار لازم از اینگونه با استفاده از تور پلانکتون گیری و قایق موتوری در سواحل نور و خلیج گرگان جمع آوری شد ، پس از جداسازی نمونه های آب و شانه دار، آنها جهت آنالیز یونی و اسمزی به آزمایشگاه های یون کروماتوگرافی و اسمومتری منتقل شدند تا مشخص شود که جزو تطبیق دهنده های اسمزی ، با تنظیم کننده های اسمزی هستند. مطالعه تنظیم یونی و فشار اسمزی در سواحل جنوبی دریای خزر نشان می دهد که این گونه در شوریهای ‏‎12/5-16ppt‎‏ زندگی می کند. غلظت یونهای سدیم، پتاسیم، منیزیم، کلسیم، سولفات و کلر در مایع بدن مشخص شد. مقایسه مطالعات انجام شده میان آب و مایع بدن شانه دار آشکار کرد که غلظت یونهای سدیم، منیزیم، کلسیم، سولفات و کلر در آب دریا بیشتر، بجز پتاسیم که غلظت آن پائین تر است.