نام پژوهشگر: علی پیمان زارعی محمودآبادی

به کارگیری آنزیم ایمنواسی به منظور تعیین غلظت سرمی گلوتایتون - s - ترانسفراز - 11 علامه، عبدالمیر
پایان نامه وزارت علوم، تحقیقات و فناوری - دانشگاه تربیت مدرس 1377
  علی پیمان زارعی محمودآبادی

گلوتاتیون - s - ترانسفراز سیتوزولی بعنوان یک خانواده آنزیمی است که کنژگاسیون تعداد زیادی از ترکیبات الکتروفیل اگزوژن و اندوژن را با گلوتاتیون کاتالیز می کند. این آنزیم به سه دسته، آلفا، مو و پی تقسیم می شود، که دسته پی بعنوان شاخص در تعدادی از سرطانها، از جمله، کبد، لوسمی، مری، معده، رود بزرگ و ... معرفی شده است ، لذا تشخیص و اندازه گیری این فاکتور در بافت و سرم می تواند در تشخیص سرطان مفید باشد. تاکنون در روشهای مختلف جهت تشخیص آن ارائه شده است ، از جمله می توان به ایمینوهیستوشیمی، رادیو ایمنواسی، ایمیونوفلورسانس اشاره کرد. هدف از این مطالعه طراحی روش آنزیم ایمینواسی (elisa) جهت اندازه گیری میزان سرمی gst-? بود. ابتدا آنزیم gst-? بعنوان آنتی ژن از جفت انسان و با به کارگیری کروماتوگرافی تعویض یون، افینیتی کروماتوگرافی و ایمینوافینیتی کروماتوگرافی با فعالیت ویژه 92u/mg protein تلخیص شده و با کمک الکتروفورز sds - page خلوص آن مورد بررسی قرار گرفت ، سپس gsa-? و gst-? نیز از کبد موش صحرایی و با استفاده از روش های کروماتوگرافی تعویض یون و افینیتی کروماتوگرافی تلخیص شد (فعالیت ویژه به ترتیب 72u/mg protein و 90/3) با استفاده از خرگوش سفید نیوزیلند، anit - gst-? تولید و با کمک کروماتوگرافی تعویض یون تلخیص شد، هم چنین با استفاده از goat - anit rabbit igg بعنوان آنتی بادی ثانویه و آنزیم پراکسیداز (hrp) با روشهای مختلف کنژگاسیون آنزیم - آنتی بادی تولید شده و اقدام به طراحی روش الایزای غیر مستقیم رقابتی برای اندازه گیری gst-? در سرم گردید، پس از تعیین ویژگی، دقت و صحت روش طراحی شده، با استفاده از 42 نمونه سرمی افراد سالم، 29 نمونه سرمی بیماران مبتلا به سرطان مری و 28 نمونه سرمی بیماران مبتلا به سرطان معده آنزیم gst-? اندازه گیری شد که میانگین آن به ترتیب در افراد نرمال 10/9+-2/6 ng/ml،در سرطان مری 22/8+-3/5 ng/ml و در سرطان معده 23/7+-5/4 ng/ml بود که نسبت به میزان نرمال تفاوت معنی داری را نشان می دهد (p<0/0005). ضمنا میزان آنزیم در هر مرحله (stage) بیماری تعیین و با هم مقایسه شد که افزایش آنزیم در مراحل مختلف بیماری نیز نسبت به میزان نرمال معنی دار بود (p<0/01).