چندین مورد ایمونواسی آنزیمی (eia) برای اندازه گیری کورتیزول گزارش شده است . اینها آنزیمهای مختلفی نظیر آلکالن فسفاتاز و بتاگالاکتوزیداز و hrp را شامل می شود . اخیرا" پنسیلیناز به عنوان آنزیم مارکر برای اندازه گیری تعدادی از استروئیدها گزارش شده است . در این مطالعه از پنسیلیناز (ec 3.5.2.6) برای اندازه گیری کورتیزول در نمونه های سرم استفاده شد. مشتق cortisol -3-o-cmo تهیه شد. این مشتق به bsa و نیز پنسیلیناز کونژوگه گردید. کونژوگه اول برای تولید آنتی بادی در خرگوش سفید نیوزلند و بعدی بعنوان trancer در سنجش بکار می رود. خرگوشها به روش multi-intradermal با دوز پائین ایمونیزه شدند، تیتر آنتی سرم بعد از یک دوره 75 روزه پس از اولین تزریق به 1000 :1 و تیتر tracer به 500 : 1 رسید. این آنتی سرمها واکنش متقاطع قابل ملاحظه ای با استروئیدهای دیگر نداشتند (حداکثر 4 با 11 - داکسی کورتیکواسترون). سیستم سنجش هومولوگ برای اندازه گیری کورتیزول در سرم از حساسیت و ویژگی خوبی برخوردار است . منحنی های استاندارد در بافر pbs و سرم استریپ شده با معرفهای رنگی و شرایط حرارتی متفاوت بدست آمد. از دمای 60 به مدت 30 دقیقه برای آماده سازی نمونه ها در تمامی سنجشهای استاندارد و اندازه گیری کورتیزول در نمونه های افزوده شده به سرم، (90-110) است . cv در intraassay کمتر از 8/5 و در interassay حداکثر 12 است . همبستگی خوبی بین نتایج اندازه گیری نمونه ها به روش ria (بیمارستان شریعتی) و eia (روش ما) بدست می آید و r=0/99 است . بطور خلاصه، با وجود حساسیت خوب eia، نیمه عمر طولانی tracer، قیمت پایین تجهیزات و ایمنی در کاربرد eia ، پیشنهاد می شود که در آزمایشگاههای بالینی برای اندازه گیری هورمون کورتیزول روش eia جایگزین روش ria شود.