نام پژوهشگر: فریبا گلچین فر

تخلیص نوکلئوپروتئین ویروس h9n2 آنفلوانزای پرندگان
پایان نامه وزارت علوم، تحقیقات و فناوری - دانشگاه پیام نور - دانشگاه پیام نور استان البرز - دانشکده کشاورزی 1394
  سیده سعیده حسینی   محمد علی ابراهیمی

بیماری آنفلوانزای پرندگان سالانه خسارت اقتصادی فراوانی به صنعت طیور در سراسر دنیا وارد می کند. آنفلوانزای پرندگان بیماری بسیار واگیرداری است که موجب بروز علایم در سیستم های تنفسی، گوارشی و اعصاب در طیف وسیعی از پرندگان می گردد و قابل انتقال به پستانداران از جمله انسان می باشد. ویروس آنفلوانزا، ویروسی پلی مورفیک از خانواده ارتومیکسوویروس ها است و این ویروس با ژنوم rna تک رشته ای، دارای 8 نوع پروتئین ساختاری و 2 نوع پروتئین غیر ساختاری بوده و نوکلئوپروتئین (np) از پروتئین های ساختاری و داخلی ویروس می باشد. این تحقیق به منظور معرفی روش ساده و کاربردی و سریع جهت جداسازی نوکلئوپروتئین ویروس آنفلوانزای پرندگان صورت پذیرفت. پروتئین خالص شده را می توان به منظور تهیه آنتی سرم اختصاصی نوکلئوپروتئین استفاده نمود. به این منظور ابتدا ویروس آنفلوانزای پرندگان n_2 h_9 جداشده از مایع الانتوئیک تخم مرغهای جنین دار 10 روزه را سانترفیوژ و با استفاده از پلی اتیلن گلیکول 6000 و با وزن حجمی 10% و گرادیانت سوکوروز در شیب 60-30 درصد ویروس تخلیص گردید. با استفاده از دستگاه preparative electrophoresis(prepcell 491) پروتئین های ویروس آنفلوانزا جداسازی و به صورت فراکسیونهایی تهیه شد. میزان جذب پروتئین فراکسیون ها با دستگاه اسپکتوفوتومتر در nm280 مشخص شده و فراکسیونهای دارای جذب، لیوفریزه گردید و سپس آنالیز پروتئین با sds-page و رنگ آمیزی نیترات نقره مشخص نمود که نمونه هایی بدست آمده موردنظر حاوی نوکلئوپروتئین خالص بوده و عاری از سایر پروتئینهای ویروس است. نتایچ بررسی فراکسیونهای لیوفریزه شده حاوی نوکلئوپروتئین روی ژل اگار عدم حضور rna ژنوم ویروس همراه با نوکلئوپروتئین و خلوص بالای نوکلئوپروتئین را نشان داد.