نام پژوهشگر: سید داود حسینی

بررسی انتقال ژن vp28 به میکروجلبک
پایان نامه وزارت علوم، تحقیقات و فناوری - دانشگاه علوم کشاورزی و منابع طبیعی ساری - دانشکده علوم کشاورزی 1392
  سیدمهدی رضایی   سید داود حسینی

چکیده یکی از مهمترین مشکلات صنعت آبزی پروری به ویژه تولید میگو، خسارت بالای ناشی از بیماری های ویروسی است. بیماری لکه سفید میگو یکی از شایع ترین بیماری های ویروسی می باشد. ژن vp28 مهمترین ژن عامل بیماری در پوشش سلولی ویروس است که خاصیت ایمینولوژی آن در تولید واکسن به اثبات رسیده است. در این تحقیق امکان تولید واکسن خوراکی برای میگو با انتقال ژن vp28 به میکروجلبک مورد بررسی قرار گرفته است. ژن vp28 از موسسه تحقیقات واکسن و سرم سازی رازی شعبه منطقه مرکزی کشور(اراک) هدیه داده شد. پس از بررسی‏های بیوانفورماتیکی روی توالی‏های ژنی مشابه موجود در بانک ژن، پرایمرهای اختصاصی برای تکثیر ژن vp28 طراحی گردید. محصولات بدست آمده از pcr نمونه های نمونه های میگوی آلوده به ویروس در وکتور ptz57r/t و سپس در وکتور pet28a همسانه‏سازی و توالی‏یابی گردید. ژن vp28 ابتدا به پلاسمید pbi121 انتقال داده شد و سپس ژن مورد نظر به همراه پروموتور و ترمیناتور موجود در پلاسمید pbi121 به جایگاه کلونینگ پلاسمید pcambia1304 منتقل گردید. میکروجلبک های کلرلا ولگاریس( chlorella vulgaris ) و اسپیرولینا پلتنسیس( spirulina platensis ) در محیط زاروک کشت شده و مقاومت هر کدام از آنها به آنتی بیوتیک هاگرومایسین مورد سنجش قرار گرفت. تراریخته کردن اسپیرولینا و کلرلا از الکتروپوریشن استفاده شد. علاوه بر این از سویه های مختلف آگروباکتریوم تومفاشین (gv3101 , eha101 , gv3850 lba4404 ) برای تولید کلرلای تراریخت استفاده شد. ادغام ژن vp28 در سلولهای کلرلا توسط الکتروپوریشن و همچنین با واسطه سویه های eha101 , gv3850 موفقیت آمیز بود. در حالیکه انتقال ژن vp28 به اسپیرولینا پلتنسیس در این تحقیق حاصل نشد. بر اساس نتایج بدست آمده تولید سلول های کلرلای تراریخته حاوی ژن پوششی vp28 امکان پذیر بوده و پتانسیل استفاده از این سلول های تراریخته به عنوان واکسن برای مقابله با بیماری ویروسی لکه سفید میگو وجود دارد. بیان ژن vp28 در سلولهای کلرلای تراریخته با استفاده از rt-pcr مورد بررسی قرار گرفت و حضور رونوشت های ژن مذکور در این سلول ها تأیید گردید. کلمات کلیدی: لکه سفید میگو، vp28، میکروجلبک تراریخت، کلرلا ولگاریس، اسپیرولینا پلتنسیس