cdna نمیوپسین ( فتوپروتئین وابسته به کلسیم ) از یک شانه دار تولید کننده نور بنام نمیوپسیس لیدی کلون، بیان، تخلیص، تعیین توالی و تعیین هویت شد. این cdna از 621 جفت باز تشکیل شده است که یک پروتئین 206 اسید آمینه ای را کد می نماید. cdnaی کد کننده نمیوپسین از نمیوپسیس لیدی در e. coli بیان وسپس تخلیص شد که یک باند منفرد را با وزن مولکولی 27 کیلو دالتون روی ژل sds-page نشان داد. بعد از آماده سازی نمیوپسین semi-synthetic با استفاده از کلنترازین و edta در حضور cacl2 از خود فعالیت لومینسانس نشان داد. مقایسه دو گروه معروف فتوپروتئین های وابسته به کلسیم یعنی کلنتراتها و کتنوفورها تشابه بالایی در ساختار سوم آنها بدون توجه به تشابه پایین توالی میان آنها نشان داد. این فتوپروتئینها با تشابه پایین توالی می توانند نقش مهمی در درک اساس ساختاری فعالیت بیولومینسانس داشته باشند. سکانس آمینو اسیدی حاصل از ژن نمیوپسین حدود 90 درصد تشابه با فتوپروتئین های کتنوفوری و 51 درصد با فتوپروتئین های کلنتراتی نشان داد. آنالیز توالی و ساختار افزایش تعداد بارهای منفی لوپهایی که کلسیم به آنها متصل می شوند را در کتنوفورها به نسبت کلنتراتها نشان داد که منتج به حساسیت بیشتر و بالا برای اتصال به کلسیم می باشد. بعلاوه مقایسه آمینو اسیدهای درگیر در جایگاه اتصال سوبسترا نشان داد که حفره اتصال فتوپروتئینهای کتنوفوری حاوی تعداد کمی از اسیدهای آمینه حلقوی ( آروماتیک) می باشد. این مشاهدات می تواند مارا به کاهش میانکنشهای stacking میان سوبسترا و پروتئین و بدنبال آن اهمیت اثرات پایداری کلنترازین در حفره هدایت نماید. پروفایل هیدروپاتی برای رزیدوهای حفره الگوی متفاوتی را در این دوگروه نشان داد. تفاوت اسیدهای آمینه در جایگاه اتصال سوبسترا و محیط اطرافش سبب الگوی متفاوت شبکه پیوند هیدروژنی در ناحیه مربوطه در کتنوفورها در مقایسه با کلنتراتها می شود . مقایسه ساختاری این دو گروه با تشابه توالی پایین و تشابه ساختمان سوم بالا می تواند یک دیدگاه جدیدی را در مکانیسم تابش نور در این فتو پروتئینها ایجاد می نماید.

آنژیوژنز در بسیاری از شرایط پاتولوژیک همچون رشد تومور، متاستاز، رتینوپاتی دیابتی، روماتوئید آرتریت و پسوریازیس نقشی کلیدی ایفا می کند. از میان تمامی فاکتورهای آنژیوژنیک، فاکتور رشد اندوتلیال رگی (vegf) مهمترین فاکتور آنژیوژنز محسوب می شود و فعالیت آن از طریق اتصال به دو گیرنده تیروزین کینازی به نام های گیرنده flt-1 (vegfr-1) و گیرنده kdr (vegfr-2) انجام می شود. هومودایمر vegf از طریق اتصال به vegfr-2 و القاء دایمریزاسیون آن باعث اتوفسفریلاسیون و فعال سازی مسیرهای انتقال سیگنال آنژیوزنز می شود. vegf به دلیل نقش اساسی اش در آنژیوژنز پاتولوژیک، به عنوان یک هدف دارویی ارزشمند برای درمان های ضدآنژیوژنز مطرح می باشد. یک واریانت هترودایمر از vegf (hd-vegf) که جایگاه اتصال به گیرنده آن در یک قطب دایمر دست نخورده و در قطب دیگر بلاک شده باشد تنها قادر خواهد بود به مونومر گیرنده متصل شود و در نتیجه قادر به القاء دایمریزاسیون گیرنده و انتقال سیگنال نخواهد بود. بنابراین hd-vegf می تواند به عنوان آنتاگونیست vegf عمل کرده و فعالیت وابسته به گیرنده vegf، که برای فرایندهای آنژیوژنز ضروری می باشد را متوقف نماید. با چنین فرضی، در این تحقیق جایگاه های اتصال vegf به kdr براساس ساختار کریستالی کمپلکس vegf-kdr بطور دقیق مشخص و با قطعات مناسب از سایر پروتئین ها در ساختار کریستالی مربوطه جایگزین شدند. پس از ساخت مدل سه بعدی جهش یافته و بهینه سازی آن توسط شبیه سازی دینامیک ملکولی، اتصال آن به گیرنده با استفاده از docking molecular مورد بررسی قرار گرفت. نتایج بیانگر نامناسب بودن انرژی میانکنش این کمپلکس پروتئینی و در نتیجه عدم اتصال vegf موتانت به گیرنده می باشد. براساس مدل ساخته شده، ژن کد کننده دمین اتصال به گیرنده vegf که حاوی قطعات جایگزین فوق بود سنتز شد. قطعه کد کننده دمین اتصال به گیرنده vegf طبیعی در pet-28a+ دارای his tag و قطعه کد کننده دمین اتصال به گیرنده ژن vegf جهش یافته در وکتور بیانی pet-21a+ دارای strep tag درج و در باکتری e. coliبه صورت inclusion bodies بیان و پس از مخلوط نمودن رسوب با نسبت های برابر جهت تولید واریانت هترودایمر vegf، طی فرایند چند مرحله ای refold گردیدند. بدلیل وجود دو tag متفاوت، جداسازی هترودایمر vegf از همودایمرهای طبیعی و جهش یافته با استفاده از کروماتوگرافی تمایلی دو مرحله ای و توسط ستون هایni-nta agarose و strep-tactin صورت پذیرفت. دایمر شدن واریانت های مختلف vegf که لازمه فعالیت این پروتئین می باشد از طریق sds-page و روش المان تایید گردید. مطالعات اسپکتروسکپی cd و فلورسانس تغییرات ساختاری محسوسی را در hd-vegf در مقایسه با هومودایمر طبیعی و جهش یافته نشان نداد ونیز شکل گیری صحیح فرم هترودایمر و همچنین صحت فرایند تخلیص را تائید نمود. توان ضدآنژیوژنز واریانت hd-vegf نیز بررسی گردید. نتایج نشان داد که این واریانت در غلظت های پائین به طور قابل توجهی قادر به مهار تکثیر و تشکیل لوله های مویرگی سلول های اندوتلیال می باشد (با ng/ml 24 و 33 ic50= به ترتیب برای تکثیر سلول-های اندوتلیال و تشکیل لوله های مویرگی). براساس این مطالعات می توان نتیجه گرفت که hd-vegf در اتصال به گیرنده با vegf طبیعی قادر به رقابت بوده و مانع از فعالیت آن در شرایط in vitro می گردد. ضمنا این واریانت در مقایسه با سایر آنتاگونیست های ضدآنژیوژنزvegf که تاکنون ساخته شده اند قدرت مهاری بسیار بالاتری دارد.

ماهی سفید(rutilus frisii kutum) یکی از گونه های مهم دریای خزر است که دارای ارزش غذایی و اقتصادی می باشد. به منظور مطالعه ی سیستم ایمنی غیر اختصاصی این ماهی و عوامل موثر بر آن، نمونه برداری از جنس ماده ی ماهی سفید طی یک دوره ی هشت ماهه (از مهر1390 تا اردیبهشت 1391) از منطقه ی جفرود انزلی و رودخانه سفیدرود انجام شد. خونگیری و نمونه ی مخاط پوست به ترتیب توسط سرنگ 5 سی سی و لام تهیه گردید. بافت های کلیه، کبد و طحال نیز از ماهی جدا شده و تا آنالیز در فریزر نگهداری شدند. همچنین مراحل رسیدگی جنسی ماهی طی مراحل بافت شناسی تعیین گردید. فعالیت لیزوزیم و میزان پروتئین تام طی تست توربیدیمتریک و روش بردفورد مشخص گردید. نتایج نشان داد که لیزوزیم سرم و بافت های ماهی (به جز بافت طحال) طی ماههای نمونه برداری از مهر تا دی روند صعودی داشت ( در مخاط از مهر تا آذر این روند دیده شد) و سپس بعد از آن در اسفند ماه در سرم، مخاط و بافت ها نزول پیدا کرد. نهایتا غلظت لیزوزیم در ماه اردیبهشت یعنی بعد از مهاجرت ماهی به رودخانه در سرم، مخاط و بافت ها افزایش یافت (p<0.05). غلظت لیزوزیم سرم، مخاط و بافت های ماهی سفید خزر (به جز بافت طحال) از مرحله ی رشد اولیه ی اووسیت تا مرحله ی آلوئل کورتیکال روند صعودی داشته و بعد از آن در مرحله ی زرده سازی کاهش یافت. بعد از مهاجرت ماهی به رودخانه برای تخم ریزی غلظت لیزوزیم به طور معنی داری افزایش یافت(p<0.05) . غلظت پروتئین تام نیز نوساناتی تقریبا همانند لیزوزیم هم در مخاط و هم در بافت ها داشت. در مجموع، نتایج حاکی از اثر دما، رسیدگی جنسی و مهاجرت روی غلظت لیزوزیم در سرم خون، مخاط پوست و بافت های جنس ماده ی ماهی سفید خزر می باشد. همچنین غلظت لیزوزیم در بافت ها به طور چشمگیری از سرم خون و مخاط پوست بیشتر بود که به نظر می رسد به دلیل نقش بیشتر بافت ها در سیستم ایمنی غیر اختصاصی باشد.

ماهی سفید از ماهیان استخوانی متعلق به خانواده ی cyprinidae، جنس rutilus با نام علمی rutilus frisii kutum از ماهیان بومی دریای خزر است. به منظور مطالعه اثرات مراحل مختلف رشد بیضه و تغییرات دما بر میزان لیزوزیم و پروتئین تام سرم خون، مخاط پوست و بافت های کلیه، کبد و طحال، نمونه برداری ماهانه ( مهر 1390 تا اردیبهشت 1391) از منطقه ی جفرود انزلی صورت پذیرفت. پس از انتقال نمونه ها به آزمایشگاه سرم خون و مخاط پوست از آن ها تهیه و جهت تهیه ی عصاره های بافتی بافت های مذکور از ماهی جدا و به منظور انجام مراحل بعدی آزمایش در دمای c°70- نگهداری شد. پس از تشخیص مراحل مختلف رسیدگی جنسی، میزان لیزوزیم و پروتئین تام به ترتیب با استفاده از روش توربیدیمتریک و بردفورد اندازه گیری گردید. نتایج این پژوهش نشان داد که لیزوزیم سرم و بافت ها طی ماه های نمونه برداری از مهر تا دی روند صعودی دارد و بعد از آن تا اسفند نزول پیدا کرده و نهایتا تا اردیبهشت افزایش می یابد. میزان لیزوزیم مخاط پوست تا ماه آذر روند صعودی معنی داری داشته (p<0.05) و سپس تا ماه اسفند طی کاهش دمای آب روند نزولی را طی کرد و در اوایل اردیبهشت به طور معنی داری افزایش یافت (p<0.05). غلظت لیزوزیم سرم، مخاط و بافت های کبد و طحال طی پیشرفت رشد بیضه از مرحله ی رشد اولیه تا رشد ثانویه روند صعودی دارد و سپس در مرحله ی بالغ نزول یافته (به جز کلیه) و مجددا در مرحله ی اسپرم ریزی با مهاجرت به رودخانه افزایش می یابد، به طوری که این افزایش در بافت ها چشمگیر می باشد. پروتئین تام نیز روندی مشابه با لیزوزیم (به جز کلیه) را پیمود. نتایج به دست آمده در این بررسی حاکی از اثر دما و رسیدگی جنسی بر سطح لیزوزیم ماهی سفید می باشد به طوری که دما تاثیر سریع تری بر مخاط و عوامل دخیل در رشد بیضه، بر لیزوزیم سرم و بافت ها را دارد.

کاتالاز یک متالوآنزیم می باشد و هیدروژن پراکسید را به آب و اکسیژن می شکند و دارای گستردگی وسیعی در بین حیوانات، گیاهان و میکروارگانیسم ها می باشد. بیشتر اطلاعات حاصل از منابع حیوانی، باکتریها و قارچی می باشد و اطلاعات در مورد منابع گیاهی محدود است. ما در این مطالعه به تخلیص نسبی آنزیم کاتالاز و بررسی ویژگی های بیوشیمیایی آن در گیاه chenopodium ambriosioides پرداخته ایم. گیاه chenopodium ambriosioides گیاهی علفی است که سال ها به عنوان یک گیاه دارویی به عنوان آفت کش و کرم کش استفاده می شده است. به منظور استخراج این آنزیم از بافر فسفات 50 میلی مولار با edta 2میلی مولار و pvpp ?1 استفاده شد فعالیت آنزیم در طول موج 240نانومتر و در طی 90 ثانیه توسط اسپکتروفتومتری مورد سنجش قرار گرفت و غلظت پروتئین آنزیم توسط روش برادفورد مورد سنجش قرار گرفت. تخلیص نمونه با استفاده از ستون deae-sepharose صورت گرفت. و پارامترهای سنتیکی km و vmax به ترتیب 30 و 28 میلی مولار محاسبه شد. و حداکثر فعالیت آنزیم در ph 7 حاصل گردید.

پراکسیدازها (ec 1.11.1.x ,pod) آنزیم هایی متعلق به کلاس اکسیدوردوکتازها هستند که واکنش های اکسیداسیون سوبسترا های مختلف ار گانیک و غیر ارگانیک را با استفاده از هیدروژن پر اکسید به عنوان پذیرنده ی الکترون کاتالیز می کنند. پراکسیداز یکی از پروتئین های آهن دار گیاهی است که کاربرد گسترده ای در تشخیصهای پزشکی و تجربیات آزمایشگاهی مختلف دارد، به همین علت امروزه تلاش زیادی صورت می گیرد تا منابع جدیدی از بافتهای گیاهی با فعالیت پراکسیدازی مناسب معرفی گردد. چای سبز camellia sinensisبه عنوان نوشیدنی با ارزش دارویی مصرف گسترده ای در جهان دارد، که به دلیل دارا بودن مقادیر بالای آنتی اکسیدان ها که پراکسیداز از جمله آن هاست قادر است رادیکال های آزاد را جذب نموده و آن ها را به ترکیبات بی ضرر تبدیل کند در نتیجه در مهار کردن واکنش های اکسیداتیوی که باعث آسیب به بدن می شوند، موثر است. در این تحقیق در ابتدا مقایسه فعالیت پراکسیدازی آنزیم پراکسیداز در برگ چای روئیده شده در ارتفاعات مختلف لاهیجان (534 متر، 305 متر و 50 متر) به منظور بررسی اثر ارتفاع بر روی فعالیت این آنزیم صورت گرفت که نتایج تاثیر مثبتی را بر روی فعالیت آنزیم نشان داد. در ادامه با توجه به اینکه پراکسیداز نسبت به سایر آنتی اکسیدان های آنزیمی از پایداری بیشتری برخوردار است و موارد استفاده بسیار زیادی در صنعت دارد، این آنزیم را از چای با استفاده از کروماتوگرافی تعویض یونی تخلیص شد و به منظور استفاده هرچه بیشتر این آنزیم بویژه در صنعت که مستلزم شناخت ویژگی های بیوشیمیایی آن است، تعدادی از پارامترهای سینتیکی آن از جمله km و vmax و ph بهینه آن مورد بررسی قرار گرفت.

شناخت از اینکه چگونه تخم¬ها، جنین و لارو ماهیان قبل از کامل شدن سیستم ایمنی¬شان در برابر حمله¬های پاتوژنیک زنده می-مانند، جهت حفظ ذخایر ماهی ضروری است.بدین منظور، نمونه¬های تخم لقاح¬یافته (1 ساعت پس از لقاح)، تخم چشم¬زده (جنین 6 روزه)، لارو 10 روزه، لارو 200، 500، 800 و 1000 میلی¬گرمی و نمونه¬ی ماهی بالغ ماده ماهی سفید دریای خزر (rutilusfrissikutum)در بهار و تابستان 1391 از مرکز شهید انصاری گیلان تهیه شد.خونگیری از نمونه¬های بالغ ماده انجام گرفت. سایر نمونه¬ها نیز هموژن گردیده و پس از سانتریفیوژ تا زمان آنالیز در فریزر °c70- نگهداری شدند. غلظت لیزوزیم از طریق تست توربیدیمتریک، میزان پروتئین تام از طریق روش بردفورد و میزان پروتئین c3با استفاده از روش نفلومتری مشخص گردید. نتایج نشان دادند که میزان لیزوزیم از مرحله¬ی تخم لقاح¬یافته تا لارو 10 روزه روند نزولی داشته و پس از آن تا مرحله¬ی لارو 1000 میلی¬گرمی افزایش معنی¬داری داشت(p<0.05). غلظت پروتئین تام نیز نوساناتی همچون لیزوزیم داشت، با این تفاوت که از مرحله¬ی لارو 200 میلی¬گرمی تا لارو 1000 میلی¬گرمی روند مشخصی در میزان آن دیده نشد. در میزان پروتئین c3 یک روند افزایشی از تخم لقاح¬یافته تا لارو 10 روزه دیده شد و پس از آن این روند بطور معنی¬داری شکل نزولی به خود گرفت (p<0.05). در مجموع نتایج بالاتر بودن میزان لیزوزیم نسبت به میزان پروتئین c3 را در مراحل ابتدایی زندگی ماهی سفید دریای خزر نشان دادند. همچنین به نظر می¬رسد که لیزوزیم نقش بیشتری در فعالیت سیستم ایمنی در مراحل ابتدایی زندگی ماهی سفید دریای خزر نسبت به پروتئین c3 داشته باشد.

دود سیگار به علت داشتن رادیکال های آزاد اکسیژن و حدود 4000 دیگر ترکیبات سمی به عنوان یک عامل مضر، هم برای حفره تنفسی و هم محیط درونی بدن به اثبات رسیده است. بزاق به عنوان اولین محیط بیولوژیکی بدن که در معرض دود سیگار قرار می گیرد باید دارای سیستم دفاعی آنتی اکسیدانتی برای کاهش و یا حذف کامل فعالیت های سمی دود سیگار باشد. در نتیجه هدف از تحقیق حاضر مقایسه ی سطح آنتی اکسیدانت های بین مردان غیر سیگاری در معرض دود سیگار و مردان غیر سیگاری است. در عمل، نمونه های بزاق از 25 مرد غیر سیگاری و 25 مرد در معرض دود سیگار جمع آوری شد. ظرفیت آنتی اکسیدانتی بزاق در مراحل بعدی توسط روش های شیمیایی مختلف اندازه گیری شد. بر اساس نتایج حاصل، تفاوت آماری معنی داری در ظرفیت آنتی اکسیدانتی کل، غلظت فنل تام و فعالیت برداشت رادیکال آزاد بزاقی بین دوگروه مشاهده نشد اما غلظت اوریک اسید بزاقی در افراد در معرض دود سیگار به طور قابل ملاحظه ای کمتر از افراد غیر سیگاری بود. از طرفی، در تحقیقی هم زمان در آزمایشگاه ما که برای بررسی آنتی اکسیدانت های آنزیمی بزاق در همین دو گروه انجام گرفت، تفاوت های معنی دار مشاهده گردید. بنابراین اندازه گیری فاکتورهای آنتی اکسیدانتی در بزاق انسان ممکن است هم ارزش تشخیصی داشته باشد و از طرفی در ارزیابی سلامت و عملکرد غدد تولید کننده بزاق مفید باشد.

سیلی بین یک فلاونوئید طبیعی است که با توجه به مطالعات صورت گرفته، توانایی القای آپوپتوز در انواع سرطان ها را دارد. اما مکانیسم مولکولی آن به خوبی مشخص نشده است. در این مطالعه ما شواهدی مبنی بر یکی از مکانیسم هایی که سیلی بین از طریق آن به القای آپوپتوز در سلول های huvec می پردازد، فراهم آوردیم. در این مطالعه سلول های huvec در پلیت های 96 خانه کشت داده شدند و میزان زنده ماندن سلول با روش تست mtt سنجیده شد و میزان ic50، 75 میکروگرم در میلی لیتر مشخص گردید. سنجش فعالیت کاسپاز-9 بر اثر تیمار وابسته به غلظت )150-0 میکروگرم در میلی لیتر( و تیمار وابسته به زمان )24،48و72ساعت( با سیلی بین با استفاده از سوبسترای کروموژنیک lehd-pna انجام گرفت و سنجش قطعه قطعه شدن dna بر اثر تیمار وابسته به غلظت )200-0 میکروگرم پر میلی لیتر( با سیلی بین انجام گرفت و قطعه قطعه شدن dna در 200 میکروگرم در میلی لیتر مشاهده شد. اطلاعات بدست آمده از این مطالعه نشان داد که سیلی بین مرگ آپوپتوزی را از طریق فعال شدن کاسپاز-9 و قطعه قطعه شدن dna القا می کند.

بارداری یک وضعیت فیزیولوژیک است که در آن بدن بیشتر مستعد استرس اکسیداتیو می شود. مکانیسم های دفاعی مختلفی در برابر تولید رادیکال های آزاد و آسیب های آنها در طی بارداری ایجاد می شود اما میزان استرس اکسیداتیو به تعادل بین مکانیسم های دفاعی و مکانیسم های تولید رادیکال های آزاد بستگی دارد. با توجه به اهمیت فیزیولوژیکی و تشخیصی بزاق، در این مطالعه اثر بارداری برروی آنزیم پراکسیداز و آنتی اکسیدان های غیرآنزیمی بزاقی بررسی گردید. در قسمت عملی، 35 زن باردار به عنوان گروه تست و 35 زن غیرباردار که از نظر سنی با گروه تست همسان شده بودند به عنوان گروه کنترل انتخاب شدند. تست های frap، dpph، total phenol، سنجش اسیداوریک و آنزیم پراکسیداز روی این نمونه ها انجام شد. بررسی نتایج حاصل از این مطالعه کاهش چشمگیری را در میزان فنول تام، غلظت اسیداوریک و فعالیت آنزیم پراکسیداز در زنان باردار در مقایسه با زنان غیرباردار نشان داد، درحالیکه در ظرفیت آنتی اکسیدانی کل و فعالیت برداشت رادیکال آزاد کاهش معنی داری مشاهده نشد. بر اساس مطالعات مختلف آنتی اکسیدان های آنزیمی و غیر آنزیمی در طی بار داری کاهش می یابد. بنابراین برای جلوگیری از آسیب های ناشی از رادیکال های آزاد و استرس اکسیداتیو ایجاد شده در طی مراحل قبل از بارداری و در حین بارداری وجود سیستم آنتی اکسیدانی سالم ضروری می باشد. مطالعات مختلف نشان داده است که مصرف مکمل های آنتی اکسیدانی می تواند به بهبود سیستم آنتی اکسیدانی و حفظ دوره بارداری کمک می کند. کلمات کلیدی: آنتی اکسیدان، استرس اکسیداتیو، بارداری، بزاق

آمیلوئید، تجمع فیبریلی صفحات متقاطع- ? پروتئین می باشد که به طور کلی نامحلول است. از آنجایی که برخی بیماری های مهم در ارتباط با تشکیل این فیبریل ها هستند، بررسی چگونگی تشکیل و مهار این پدیده، موضوع بسیاری از تحقیقات قرار گرفته است. در مطالعات زیادی گزارش شده که بتالاکتوگلوبولین و لیزوزیم سفیده تخم مرغ می توانند فیبریل های آمیلوئیدی تشکیل دهند. بنابراین می توان انتظار داشت که این پروتئین ها به عنوان مدل های مناسب برای مطالعات رفتار تشکیل آمیلوئید استفاده گردند. در این تحقیق برای مطالعه رفتار تشکیل آمیلوئید فرم های طبیعی و هیدرولیز شده پروتئین لیزوزیم و بتالاکتوگلوبولین، سینتیک تجمع فیبریل های به دست آمده از این پروتئین ها در حضور و عدم حضور هپارین با پیگیری تغییرات شدت نشر فلوئورسانس tht (تیوفلاوین t) در nm 482 به طور مقایسه ایی مورد بررسی قرار گرفت.فعالیت پراکسیدازی غیر اختصاصی مجموعه هِم- آمیلوئید به دست آمده از دو پروتئین ذکر شده و قطعات پپتیدی حاصل از هیدرولیز آنها در حضور سوبسترای tmb (3و3و 5و5- تترامتیل بنزیدین) مورد بررسی قرار گرفت.

چکیده ندارد.