در این تحقیق ژن np با استفاده از سایت www.encorbio.com/protocols/codon.htm به گونه ای طراحی شده است که حاوی نوکلئو تیدهای تغییر یافته مناسب میزبان ( e.coli) باشد. توالی ژن از طریق شرکت ندای فن سنتز گردید . ساب کلونینگ np در pet-22b: ابتدا ژن np و وکتور pet-22b با آنزیمهای noti و hindiii برش داده شده و ژن np از pge-vector خارج گردید.سپس وکتور و ژن فوق در واکنش ligation وارد گردیده و در e.coli سویه top 10 ترانسفورم گردیدند. کلونهای مختلف پس از استخراج پلاسمید با برش با آنزیمهای noti و hindiii و pcr برای داشتن اینسرت غربال گردیدند. بیان ژن np در e.coli : برای بیان ژن در e.coli ازسلول bl21 استفاده گردید. برای این منظور پلاسمید نوترکیب pet-22b/np در سلول bl21 ترانسفورم گردیده پس از کشت بیان پروتئین با افزودن iptg القا گردید. سلولها سپس در ساعات مختلف جمع آوری گردیده و بیان پروتئین از طریق الکتروفورز در ژل sds-page آنالیز گردید. وسترن بلاتینگ: پروتئین بیان شده در ژل sds-page الکتروفورز گردیده و با روش وسترن بلاتینگ به غشاء نیتروسلولز منتقل گردید. این غشا سپس با آنتی بادی پلی کلونال علیه his tag انتهای c پروتئین مجاور گردیده و واکنش با آنتی ژن موجود در غشا از طریق مجاور کردن آن با آنتی بادی ضد igg موش کونژوگه با پراکسیداز و سوبسترای dab مورد بررسی قرار گرفت. نتایج: ساب کلونینگ np در pet-22b: با توجه به پیش بینی جایگاههای برش آنزیمی، از برش آنزیمی ژن np / pge-vector و وکتور بیانی pet-22b با آنزیمهای noti و hindiii برای کلونینگ استفاده گردید. کلونهای حاوی اینسرت بوسیله هضم با آنزیمهای noti و hindiii شناسایی گردیدند. . با توجه به اینکه ژن np bp 1500می باشد، انتظار داریم در صورت کلونینگ صحیح قطعه ای حدود bp 1500 از پلاسمید جدا شود. برای اطمینان کامل از وجود np در پلاسمید pet-22b، ساختار pet 22b-np با pcr تائید گردید. بیان ژنnp در : e.coli برای بیان ژن np ویروس آنفولانزا ، سازه ژنی pet 22b-npدر سلول بیانی bl21 ترانسفورم گردیده پس از القا برای تولید پروتئین نوترکیب بررسی گردیده پس از القا برای تولید پروتئین نوترکیب بررسی گردید. نتایج آزمایش فوق نشان داد که سازه ژنی فوق قادر به ابراز میزان بالایی از پروتئین np است که بصورت باندی قوی در نمونه های پس از القا در ژل sds-page دیده می شود وسترن بلاتینگ: در این آزمایش واکنش بین آنتی بادی و آنتی ژن به صورت یک با ند 60 کیلو دالتونی مربوط به پروتئین np در نمونه القا شده با iptg پس از گذشت 5 ساعت از زمان القا ظاهر گردید که نمونه کنترل فاقد آن بود.