کلون و بیان ژن آنزیم فیتاز باکتری یرسینیا اینترمدیا(appa) در باکتری اشر شیاکولی و بررسی خصوصیات آن

فیتات بزرگترین ذخیرهی فسفات دانهی بسیاری از گیاهان می باشد و تجمعاتی را با یونهای فلزی چند ظرفیتی مانند آهن، روی، کلسیم و نیز پروتئین ها تشکیل می دهد که بیانگر اثر ضد تغذیه ای این ماده می باشد. در نتیجه، فیتاز بصورت گسترده ای به عنوان یک افزودنی جهت تجزیه ی فیتات و نیزافزایش جذب فسفر و سایر عناصر در حیوانات تک معده ای به غذای آنها افزوده می شود. هدف از این مطالعه، بهینه سازی و بررسی بیان ژن فیتاز از باکتری یرسینیا اینترمدیا در باکتری اشرشیاکولی می باشد. در این تحقیق، ابتدا به منظور داشتن بیشترین بیان ژن فیتاز باکتری یرسینیا اینترمدیا در اشرشیاکولی، کدون های رایج در یرسینیا اینترمدیا که برای اشرشیاکولی نادر هستند، توسط یک سری نرم افزار های تحت وب، به نحو موثری تعویض گردیدند. سپس توالی مورد نظر سنتز و در وکتور pet22b(+) ساب کلون گردید. در مرحله بعد وکتورpet22b(+) حاوی ژن بهینه شده فیتاز در باکتری اشرشیاکولی ترانسفورم گردید. سپس بیان پروتئین، توسط القا با iptg صورت گرفت. در نهایت صحت بیان پروتئین ها توسط تکنیکsds-page بررسی شد و با انجام وسترن بلات به حضور و بیان پروتئین اطمینان حاصل گردید. سپس با انجام تست بردفورد، غلظت پروتئین کل محاسبه شد. در نهایت فعالیت آنزیم تولیدی و پایداری آن در دما و ph بهینه آنزیم (دمای 55 درجه سانتی گراد وphبرابر 15/5) به روش رنگ سنجی ارزیابی و تایید گشت.