مطالعه پروتئازهای معده میانی سوسک کلرادو سیب زمینی و بازدارنده های پروتئازها

سوسک کلرادو سیب زمینی leptinotarsa decemlineata (say) (coleoptera: chrysomelidae) در 150 سال اخیر آفت عمده مزارع سیب زمینی بوده است. روش های کنترل متفاوتی از جمله تناوب زراعی و آفت کش های شیمیایی به منظور کاهش تاثیر این آفت بر مزارع سیب زمینی به کار برده می شوند. سرین پروتئازهای دستگاه گوارش در برخی از سخت-بالپوشان از آنزیم های عمده در بین آنزیم های پروتئولیتیک هستند. در این تحقیق، فعالیت پروتئولیتیک کل، فعالیت تریپسین و کیموتریپسین مورد مطالعه قرار گرفت. ph بهینه برای فعالیت پروتئولیتیک روده میانی در لارو و حشرات کامل به ترتیب 8 و 7 به دست آمد. زایموگرام حاصل از فعالیت تریپسین و کیموتریپسین برای پروتئین های روده لارو و حشرات-کامل بصورت دو باند صورتی برای تریپسین و یک باند صورتی برای کیموتریپسین بود. مقدار فعالیت ویژه برای تریپسین و کیموتریپسین در حشرات کامل و لارو به ترتیب 06/7، 12/7 و 127/6 ، 616/5 یونیت بر میلی گرم به دست آمد. علاوه بر این اثر بازدارندگی بازدارنده جدا شده از بذر 9 لاین رقم گندم دنا، بر فعالیت پروتئولیتیک مورد مطالعه قرار گرفت. در نهایت پروتئین بازدارنده استخراج شده از لاین edit, m,12 دارای بیشترین مهارکنندگی روی فعالیت پروتئولیتیک لارو و حشرات کامل بود. همچنین آنزیم های پروتئاز روده معده میانی لارو توسط کروماتوگرافی تعویض یونی با استفاده از deae-cellulose و کروماتوگرافی ژل فیلتراسیون با استفاده از سفادکس 75g خالص شد. در نهایت سه باند برای فعالیت آنزیم های خالص شده با استفاده از non- denaturing sds- page تشخیص داده شد.