طراحی یک سیستم نانو الایزا جهت تشخیص سریع و حساس آنفلوانزای مرغی

بیماری آنفلوانزا یکی از مهمترین بیماری های ویروسی است که به صورت مشترک در بین پرندگان و پستانداران وجود دارد و توسط ویروس های خاصی که عضوی از خانواده ی ارتومیکسو ویریده هستند ایجاد می شود. مخزن این بیماری پرندگان آبزی و مهاجر است و احتمال بروز این بیماری در هر منطقه وجود دارد. روش های متفاوتی برای تشخیص آنفلوانزای پرندگان موجود است ولی از نقطه نظر سرعت در تشخیص، الایزا یکی مهمترین روش های جاری می باشد. با توجه به شیوع آنفلوانزای حاد پرندگان در سال های گذشته در مناطق مختلف ایران و از طرفی مشکلات تشخیص این بیماری صرفا بر اساس علائم بالینی و کالبد شکافی، هدف از این پژوهش طراحی یک سیستم الایزا بر پایه ی نانوذرات طلا جهت تشخیص سریع و حساس آنفلوانزای مرغی می باشد. مواد و روش ها: در این مطالعه از ویروس آنفلو انزای تحت تیپ h9n2 به عنوان آنتی ژن استفاده شد. ابتدا مقدار کل پروتئین ویروس به وسیله ی روش lowry پروتئین سنجی شد و از آزمون checker board برای تعیین غلظت مناسب آنتی ژن جهتcoating به ته چاهک های میکروپلیت استفاده شد. همچنین آنتی بادی ثانویه با نانوذرات طلا نشاندار شد و رقت بهینه آنتی بای ثانویه نشاندار شده با نانو ذرات طلا نیز به وسیله ی همین آزمون تعیین گردید. سپس با تعیین cut off یک کیت نانو-الایزا طراحی شدو نمونه سرم های تهیه شده از موسسه ی تحقیقات واکسن و سرم سازی رازی از نظر وجود آنتی بادی علیه ویروس مورد نظر بررسی شد و حساسیت و ویژگی کیت طراحی شده بدست آمد. نتایج: ویروس آنفلوانزای مورد مطالعه دارای mg/ml 15/0 پروتئین بود .بهترین غلظت آنتی ژن برای کوتینگ برابر با μg/ml 1 و رقت بهینه برای آنتی بادی ثانویه ی نشاندار شده با نانو ذرات طلا 8/1 بود. از 133 سرم مورد مطالعه در این پژوهش، 64 سرم منفی و 69 سرم مثبت بودند و با مقایسه ی این نتایج با نتایج حاصل از آزمایش همین نمونه ها با کیت طراحی شده بدون نانو ذرات، حساسیت 100%و ویژگی 92٪ محاسبه شد. بنابراین اینگونه نتیجه گیری می شود که روش طراحی شده می تواند یک روش تشخیصی مناسب برای ویروسh9n2 باشد.