انتقال ژن اینترفرون آلفا به گوجه فرنگی

سلول‎های گیاهی به دلیل تولید بیوماس بیشتر و همچنین عاری بودن از عوامل پاتوژنی، و توان انجام تغییرات پس از ترجمه برای پروتئین‎های یوکاریوتی، بهترین گزینه برای تولید پروتئین‏های نوترکیب به حساب می‏آیند. طی 10 سال گذشته بیش از 100 پروتئین نوترکیب در گیاهان تراریخت تولیدشده و حتی برخی از آنها در مرحله‎ی تجاری شدن به سر می‎برند. هدف از این مطالعه انتقال ژن اینترفرون آلفا به گیاه گوجه فرنگی بود، که برای این منظور بذور گوجه فرنگی رقم ارومیه در دمای 25 درجه در شرایط کاملاَ استریل در انکوباتور نگهداری، و در زمان مناسب در محیط کشت ms رشد داده شد و بعد از جوانه زدن، ریزنمونه‎های کوتیلدون 7 روزه و هیپوکوتیل 9 روزه، برای آلوده سازی با آگروباکتریوم حاوی ژن اینترفرون آلفا تهیه شدند. آگروباکتریوم نژاد lba4404 را در محیط کشت lb تکمیل شده با آنتیبیوتیک‎های مناسب، در دمای 28 درجه سانتیگراد کشت شد و پس از رسیدن رشد باکتری به od=1 تلقیح ریزنمونه‎ها با آن صورت گرفت. نمونه‎های کوتیلدون و هیپوکوتیل به مدت 30 دقیقه در محلول حاوی باکتری‎ها غوطه ور شدند. سپس به محیط کشت بدون آنتی بیوتیک هاگرومایسین و سپس به همان محیط کشت با 50 میلی گرم بر لیتر هاگرومایسین منتقل شدند. ریزنمونه ها هر 14 روز واکشت شدند. گیاهان تولید شده ابتدا به محیط ساقه زایی و سپس ریشه زایی منتقل شدند. بعد از استخراج dna از گیاهان تراریخته‏ی احتمالی، با استفاده از پرایمر طراحی شده برای ژن اینترفرون آلفا، حضور این ژن، با روش pcr مورد تایید قرار گرفت. گیاهان بیان کننده ژن در گلخانه تحت مراقبت ویژه قرار گرفتند تا بذر گیری از آنها صورت پذیرد.