کلون، بیان، تخلیص و بررسی آنتی ژنیسیته نواحی جدید دارای بالاترین خاصیت آنتی ژنیک زیر واحد بتای آنزیم اوره آز هلیکوباکترپیلوری در نمونه های سرم انسانی بیماران مبتلا به عفونت هلیکوباکترپیلوری

زمینه و هدف: هلیکوباکتر پیلوری شایع ترین باکتری است که جوامع انسانی را در بعد جهانی مبتلا به عفونت ساخته است. ژن ureb از مهمترین شاخص های بیماری زایی این باکتری می باشد. اوره آزیک آنزیم مولتی مر با وزن مولکولی بالا می باشد (kda 530 )و به دو زیر واحد ،? (kda 26.5 ) و ? (kda 61.7 )تقسیم شده است و این دو زیر واحد اصلی یکی از اختلافات مهم اوره آز هلیکوباکتر پیلوری با آنزیم های اوره آزسایر باکتری ها می باشد. در بررسی های ایمیونوژنیسیته ای که بر روی آنزیم اوره آز انجام شده است، نشان می دهند که آنتی بادی های مونوکلونال که با اپی توپ هایی از اوره آز b و aطراحی شده اند و فعالیت اتصالی بالایی با اوره آز در محیط آزمایشگاهی دارند، آنتی ژنیسیته ی زیر واحد b غالب تر و حفاظت شده تر است در مقایسه با زیر واحد a . هدف از این مطالعه بیان و بررسی خواص آنتی ژنیک پروتئین نوترکیب ureb هلیکوباکتر پیلوری در سرم انسان با هدف طراحی واکسن علیه هلیکوباکتر پیلوری در آینده است. مواد و روش ها: در این مطالعه تجربی، قطعه حاوی ناحیه دارای بالاترین خاصیت آنتی ژنیک ژن ureb به طول 603 جفت باز براساس نرم افزارهای بیوانفورماتیکی در زمینه epitope mapping بدست آمد، پس از تکثیر ناحیه مورد نظر با استفاده از روش pcr، در ناقل پلاسمیدیpbsk کلون شد و سپس به منظور تولید پروتئین نوترکیب در ناقل پلاسمیدی pet32a بیان شد. پس از خالص سازی پروتئین نوترکیب به وسیله کیت ni-nta، آنتی ژنیسیته آن به روش وسترن بلات با سرم افراد آلوده به عفونت فعال هلیکوباکتر پیلوری بررسی شد. یافته ها: نتایج pcr و تعیین توالی نشان داد که ژن هدف به درستی در ناقل مورد نظر کلون شده است. بیان پروتئین با استفاده از iptg القا شد. پروتئین بیان شده تخلیص و سپس دیالیز گردید و با آنتی بادی های استفاده شده در وسترن بلات واکنش داد. پروتئین نوترکیب با وزن ملکولی 42 کیلو دالتون بدست آمد. نتیجه گیری: پروتئین نوترکیب ureb دارای خاصیت آنتی ژنیک و ایمنوژنیک می باشد. بنابراین می توان از آن به عنوان کاندید مناسبی برای طراحی کیت های تشخیصی و واکسن هلیکوباکتر پیلوری استفاده نمود.