جداسازی و تشخیص مولکولی ویروس برونشیت عفونی طیور از مزارع مشکوک پرورش جوجه های گوشتی استان کرمانشاه و مقایسه آن با سوش های واکسینال

برونشیت عفونی بیماری حاد و بسیار مسری دستگاه تنفس طیور است که سالیانه خسارات زیادی به صنعت طیور کشور وارد می سازد. برای انجام این تحقیق 106 نمونه بالینی شامل کلیه، ریه و نای از مزارع پرورش مرغ گوشتی مشکوک به بیماری برونشیت عفونی در استان کرمانشاه جمع آوری شد. نمونه ها در محیط انتقال در کنار یخ به آزمایشگاه بخش تحقیقات دامپزشکی مرکز تحقیقات کشاورزی و منابع طبیعی استان کرمانشاه منتقل، و تا زمان آماده سازی برای تزریق در تخم مرغ های جنین دار 10 روزه در دمای منهای 80 درجه سانتی گراد نگه داری شدند. نمونه ها در محیط انتقال با نسبت (وزن/حجم) به صورت 10 درصد همگن و سانتریفوژ شد. به یک صد میکرولیتراز هریک از نمونه های همگن شده 100 میکرولیتر محیط انتقال اضافه و پس از 4 ساعت انکوباسیون به 3 عدد تخم مرغ جنین دار 10 روزه تزریق شد. بعد از 72 ساعت تخم مرغ ها به یخچال معمولی با دمای 4 درجه سانتی گراد منتقل، و 6 ساعت در این دما نگه داری شدند. مایع آلانتوئیک با استفاده از سرنگ 5 میلی لیتری استریل جمع آوری و آزمایش هماگلوتیناسیون و ممانعت از هماگلوتیناسیون برای تشخیص تفریقی با ویروس های نیوکاسل و آنفلوآنرا انجام شد. سپس با استفاده از کیت استخراج rna (viogene) از نمونه های آلانتوئیک استخراج و آزمایش rt-pcr انجام و محصول آن بر روی ژل آگاروز یک درصد الکتروفورز شد. محصول pcr با استفاده از کیت تجاری (bioneer, korea) تخلیص و جهت تعیین توالی به شرکت بایونیر کره جنوبی ارسال شد. نتایج آزمایش هماگلوتیناسیون نشان داد که 27 نمونه مثبت بود. آزمایش ممانعت از هماگلوتیناسیون نیز نشان داد که 10 نمونه نیوکاسل، 7 نمونه آنفلوانزا و 10 نمونه باقی مانده آنفلوانزا و نیوکاسل بود. آنالیز محصول pcr برروی ژل آگارز نشان دهنده مثبت بودن دو نمونه بود. نتایج تعیین توالی و مقایسه آن با توالی ویروس های برونشیت عفونی موجود در بانک ژن با نرم افزار dnastar نشان داد که سوش های جدا شده در این تحقیق مشابهت زیادی با ویروس های برونشیت عفونی گروه qx دارد