تولید پروتئین ترکیبی ltb, sth toxoid, cfab, cssa, cssb از باکتری etec در سیستم پروکاریوتی و ارزیابی اثرات ایمنی زایی آن در مدل حیوانی

باکتری enterotoxigenic escherichia coli مهمترین عامل اسهال مسافران و یکی از شایعترین عوامل اسهال در کودکان زیر 5 سال در کشورهای درحال توسعه می باشد. مهمترین عوامل بیماریزایی این باکتری، فاکتورهای کلونیزه کننده و سموم روده ای lt و st می باشند. تا کنون واکسنهای متعددی برای پیشگیری از عفونت etec ارائه شده اند که واکسنهای زیرواحدی از جمله آنها می باشند. در تحقیق حاضر یک واکسن کاندید زیرواحدی طراحی و بیان شده و کارایی آن از نظر القاء ایمنی و نیز مصونیت زایی در حیوان مدل موش مورد بررسی قرار گرفت. در ترکیب این کاندید واکسن، پروتئینهای زیرواحدی فاکتورهای کلونیزه کننده cfa/i و cs6 که شامل پروتئینهای cfab (برای cfa/i) و cssa و cssb (برای cs6) هستند، استفاده شده اند. مشارکت سموم روده ای در ساختار واکسن کاندید منوط به از بین بردن سمیت آنها می باشد. به همین دلیل در مورد سم lt زیرواحد b آن (ltb) که فاقد ویژگی سمی است و یک ادجوانت بالقوه محسوب می شود در ترکیب واکسن کاندید بکار برده شد. سم st علاوه بر سمی بودن، به دلیل کوچک بودن اندازه، توان ایمنی زایی پایینی دارد. بنابراین در این مطالعه با تغییر در ترکیب آمینواسیدی st، ویژگی سمی آن از میان رفته و برای افزایش توان ایمنی زایی اش، توالی st به صورت یک اپی توپ در داخل توالی پروتئین cfab وارد شد. اجزای واکسن کاندید از طریق رابطهای پپتیدی بهم متصل شدند و ویژگیهای مختلف ترکیب کایمریک با آنالیزهای بیوانفورماتیکی بررسی شدند. پروتئین کایمریک و نیز اجزای آن بصورت مستقل در میزبان پروکاریوتی بیان و تخلیص شدند و برای ایمن کردن حیوانات بکار رفتند. بررسی سرم حیوانات ایمن شده حاکی از القاء ایمنی هومورال از نوع igg و iga بر علیه پروتئین کایمریک بود. این سرم در آزمون ایمونوبلات قادر به شناسایی تک تک زیرواحدها بوده و در آزمون بچه موش شیرخوار نیز توانست سم st را خنثی نماید. همچنین ایمنی شکل گرفته برعلیه پروتئین کایمریک در بدن حیوانات ایمن شده آنها را در برابر دز کشنده باکتری بیماریزای etec حفاظت کرد. این پروتئین ترکیبی با اعمال تغییراتی می تواند به عنوان یک کاندید واکسن برای باکتری etec مطرح شود.