امکان سنجی جداسازی پروموتر بتا-اکتین از میگوی ببری سبز

تولید موجودات با ویژگی¬های برتر همیشه جزء اهداف بشر بوده است. یکی از راه¬های دست-یابی به این هدف بیوتکنولوژی است. بیوتکنولوژی از طریق تولید موجوداتی با رشد بیش¬تر، مقاوم¬تر به شرایط حاد و عوامل بیماری¬زا زمینه نیل به این هدف را مهیا می¬کند. وکتورهای بیانی یکی از کلیدی¬ترین ابزار در جهت تولید موجودات تراریخت است و مهم¬ترین جزء این ابزار پروموتر بکار رفته در آن است. پروموتر است که مشخص می¬کند چه زمان و با چه قدرتی آنزیم rna پلیمراز به dna متصل شود. در حوزه آبزی¬پروری بیش¬ترین توجه به سمت پروموتر¬های ویروسی و پستانداری معطوف شده بود اما با گذشت زمان و بررسی¬های بیشتر نقص این پروموترها در حوزه آبزی¬پروری نمایان شد و محققین رو به پروموترهای با منشاء دریایی آوردند. پروموتر بتا اکتین یکی از گزینه¬های مطرح در این حیطه است. این پروموتر سبب بیان بالای بتااکتین در بدن موجود می¬شود و بیان آن دائمی و غیرالقائی است. در این پژوهش جداسازی پروموتر بتا اکتین از میگوی ببرسبز با استفاده از روش¬های semiaflp، rs-pcr، mrs-pcr و inverse pcr امکان¬سنجی شد. dna ژنومی با استفاده از روش¬هایی از قبیل ctab، tes و dellaporta و همین¬طور با استفاده از کیت-های تجاری استخراج شد. این پژوهش نشان داد که روش¬های rs-pcr و mrs-pcr چندان امیدوار کننده نیست. با استفاده از روش inverse pcr قطعه¬ای به طول تقریبا 350 جفت باز به دست آمد اما پس از آنالیز توالی آن مشخص شد در پایین دست پروموتر قرار دارد. با تغییراتی در روش semiaflp قطعه طویل¬تری حاصل شد که حدود 500 جفت باز داشت. در این روش ابتدا dna ژنومی با استفاده از سه آنزیم برشی b، h و s مورد هضم قرار گرفت. در ادامه آداپتورهای این سه آنزیم به جایگاه¬های مربوطه متصل شدند. در pcr دور اول روی ژل آگارز باند واضحی در محدوده 500 جفت بازی مشاهده گردید. این نتیجه با استفاده از pcr آشیانه¬ایی تأئید شد. توالی¬های بدست آمده از سه نمونه تعیین توالی شدند و با استفاده از نرم افزار بلاست همولوژی آن¬ها بررسی گردید که نتایج بلاست نمونه¬ها نشان داد که دو توالی با پروموتر بتا اکتین l. vannamei همولوژی دارند.