جداسازی و شناسایی باکتری های هوازی تولید کننده آنزیم تاناز از منابع محیطی

تانن، گروهی از پلی فنل¬های طبیعی و محلول در آب است که به پروتئین¬ها متصل و موجب غیر¬قابل هضم شدن آن¬ها می¬گردد. تانن¬آسیل-هیدرولاز( (ec.3.1.1.20آنزیم کلیدی هیدرولیز تانن است که پیوندهای استری را در تانن قابل هیدرولیز می¬شکند. هدف از این تحقیق جداسازی باکتری¬های تولیدکننده تاناز از منابع محیطی می¬باشد. برای این منظور نمونه¬هایی از مزرعه گندم، خاک برگ، مدفوع گاو، گوسفند، بقایای در حال فساد خرما، برگ¬های در حال فساد اکالیپتوس، ریزوسفر درختان خرما، درخت سرو، اقاقیا، پسماند چای دفن شده در خاک و پسماند زیتون جمع آوری شد. بعد از مرحله غنی سازی و کشت در محیط اختصاصی دارای تانن و انجام سنجش آنزیمی، منحنی رشد جدایه¬های منتخب در مقادیر مختلف دما و ph رسم شد. همچنین اثر فاکتورهای ph، دما، منبع نیتروژن و سوبستراهای مختلف کشاورزی بر تولید آنزیم توسط آن¬ها بررسی شد. پایداری آنزیم¬های تولید شده در دما، ph و پروتئازهای مختلف و واحد آنزیمی آن¬ها نیز محاسبه شد. این جدایه¬ها با استفاده از تست¬های بیوشیمیایی و تعیین سکانس ژن 16s rrna تعیین هویت شدند. در نتیجه این تحقیق، 43 باکتری جداسازی شد که بعد از انجام سنجش آنزیمی، 20 جدایه توانایی تولید تاناز را داشتند. از این 20 جدایه، 3 جدایه برتر انتخاب شدند. سه جدایه که بیشترین میزان تولید را داشتند متعلق به گونه¬های klebsiella pneumoniae، cloaca enterobacter،pseudomonas solanaceanum تشخیص داده شدند. شرایط بهینه برای تولید تاناز توسط جدایهrg strain klebsiella pneumoniae عبارت بودند از: دمای تولید 30 درجه¬ سانتی¬گراد،5/5 ph ، منبع نیتروژن بهینه آمونیوم سولفات و بهترین تولید در حضور سوبسترای دانه بلوط آسیاب شده در مدت زمان 48 ساعت. و توسط جدایه¬ی strain rp p.solanaceanum عبارت بودند از : دمای 30 درجه سانتی¬گراد، 7 ph ، منبع نیتروژن بهینه آمونیوم سولفات، بهترین تولید در حضور سوبسترای دانه بلوط در مدت زمان 48 ساعت و توسط جدایه¬ی strain rf cloacae e.: دمای تولید 37 درجه¬ سانتی¬گراد، 5/5 ph ، منبع نیتروژن بهینه، نیترات سدیم و بهترین تولید در حضور سوبسترای پوست انار. آنزیم تاناز k. pneumoniae در دمای 30 درجه سانتی¬گراد و 5/5ph بهترین فعالیت را دارد و واحد آنزیمی تاناز و محتوای پروتئینی باکتری آن به ترتیب u/ml45 و mg/ml223/0 بود. آنزیم تاناز p.solanaceanum در دمای 65 درجه سانتی¬گراد و 5/5 ph بهترین فعالیت را دارد و واحد آنزیم تاناز و محتوای پروتئینی باکتری p. solanaceanum آن به ترتیب u/ml35 و mg/ml085/0 بود. آنزیم تاناز e. cloacae در دمای 55 درجه سانتی¬گراد و 7 ph بهترین فعالیت را دارد و واحد آنزیمی تاناز و محتوای پروتئینی باکتری آن به ترتیب u/ml3/42 و mg/ml233/0 بود. براساس نتایج بدست آمده می¬توان بیان کرد که باکتری¬های جداسازی شده قابلیت مناسبی جهت تولید تاناز دارند از این جدایه¬ها می¬توان به عنوان ابزار قوی زیست پالایی پسماندهای حاوی تانن و حذف تانن از غذای دام استفاده کرد.