هدفگیری همزمان رونویسی و ترجمه در سلولهای bt474 با استفاده از نانوسامانه pcxcr1-tbid-bfgf 5 utr به منظور ژن درمانی سلولهای بنیادی سرطان پستان انسانی

سلولهای بنیادی سرطان پستان که به عنوان سلولهای توموری cd44+/cd24- شناسایی میشوند اخیرا جداسازی و در in vitro کشت داده شده اند. il-8ra ، که از آن تحت عنوان cxcr1 نیز یاد می شود، گیرنده il-8 است که به خانواده ی گیرنده های کموکاین (موتیف c-x-c ) متعلق است و انتقال پیام را از طریق پروتئینهای g میانجی گری میکند. ژن cxcr1 در پا سخهای التهابی و کموتاکسی نقش دارد. در برخی از تومورها مثل پستان، بیان ژن cxcr1 افزایش قابل توجهی می یابد. به علاوه نشان داده شده است که mrna فاکتور رشد فیبروبلاستی(bfgf)یک ناحیه ترجمه نشونده انتهای´5 (5´utr) دارد که حاوی منطقه ی طویل غنی از gc و حاوی ساختارهای ثانویه است که در مقابل ماشین ترجمه به صورت متمایزی عمل میکند. فاکتور آغاز ترجمه (eif4e) یک هلیکاز وابسته به atp است که ساختارهای ثانویه را در mrna 5´ utrها باز میکند. به علاوه نشان داده شده است که eif4e در اکثر تومورهای جامد افزایش می یابد و ابن به نوبه خود باعث میشود که mrna هایی که بیانشان به دلیل ساختار خاص 5´ utrشان مهارشده بود (مانند bfgf)، ترجمه شوند. بنابراین میتوان از ناحیه تنظیمی بالادست bfgf به منظور ژن درمانی اختصاصی سرطان استفاده کرد. در این کار تحقیقاتی پروموترهای cxcr1 و cmv در وکتور pgl4.14 که حاوی ژن گزارشگر لوسیفراز است کلون شدند که به ترتیب pgl4.14c و pgl4.14x نامیده شدند. سپس ژن tbid (یک ژن کشنده پروآپوپتوتیک) در هر دو وکتورها به جای ژن لوسیفراز کلون شد و سازه های pgl4.14cb و pgl4.14xb ساخته شدند. سپس ناحیه 5´ utr mrna bfgf انسانی نیز در درون هر 4 وکتور کلون شد و وکتورهای pgl4.14xf، pgl4.14xfb، pgl4.14cf و pgl4.14cfb ساخته شدند. رده های سلولی پستانی که حاوی مقادیر مختلفی از سلولهای بنیادی سرطان پستان cd44+/cd24- هستند با سازه های حاوی ژن لوسیفراز (pgl4.14c ، pgl4.14x ، pgl4.14cf و pgl4.14xf) ترانسفکت شدند. فعالیت لوسیفراز48 ساعت پس از ترانسفکشن اندازه گیری شد. به علاوه تمامی رده های سلولی با وکتورهای حاوی ژن tbid (pgl4.14cb ، pgl4.14xb ، pgl4.14cfb و pgl4.14xfb ) نیز ترانسفکت شدند. بیان ژن tbid به صورت کمی توسط real-time pcr اندازه گیری شد. در نهایت نتایج ما تائید کننده این نکته بودند که در رده های سلولی که حاوی درصد بیشتری از جمعیت سلولهای بنیادی سرطانی میباشند، پروموتر cxcr1 و عنصر تنظیمی bfgf میتوانند بیان ژن را افزایش دهند و از این دو عنصر میتوان در درمانهایی که اساسشان از بین بردن سلولهای بنیادی است استفاده کرد.