طراحی، سنتز نوترکیب و بیان پپتید دارویی mbp8298 در باکتری escherichia coli

پایان نامه
  • وزارت علوم، تحقیقات و فناوری - دانشگاه صنعتی اصفهان - دانشکده کشاورزی
  • نویسنده مهدی عباسیان
  • استاد راهنما رضا زارعی
  • تعداد صفحات: ۱۵ صفحه ی اول
  • سال انتشار 1387
چکیده

چکیده در سال های اخیر تولید مولکول های پپتیدی به دلیل نقش اساسی آنها در فرایندهای رشد و تمایز سلول های گیاهی و جانوری و همچنین اهمیت دارویی و تجاری مورد توجه روزافزون بوده است. تولید پپتید هایی با مقادیر زیاد و خلوص بالا که به منظور مطالعات in vitro، کنترل فیزیولوژی سلولی یا به عنوان دارو مد نظر هستند به دو شیوه ی سنتز شیمیایی و بیان تراریختی انجام می پذیرد. از آنجا که بیان مستقیم پپتید های کوچک در سیستم های باکتریائی عمدتاً با شکست مواجه می شود، معمولاً با اتصال واحد های پپتیدی به یکدیگر یا اتصال توالی پپتید مورد نظر به یک توالی الحاقی (موسوم به "شریک الحاق")، می توان احتمال موفقیت بیان این دسته از مولکول ها را افزایش داد. در تحقیق حاضر پپتید 17-اسیدآمینه ای mbp8298 به عنوان یک مدل برای بیان در باکتری escherichia coli انتخاب شد. توالی dna کد کننده پلی پپتید mbp8298 با توجه به ردیف اسیدهای آمینه، ترجیح کدونی، تشکیل ساختار ثانویه ی مطلوب برای مولکول mrna، لحاظ جایگاه های برشی مناسب در توالی dna و جایگاه شکست در پلی پپتید نهایی، طراحی و تهیه گردید. برای افزایش احتمال بیان mbp8298، اتصال دو شریک الحاق، یکی پپتیدی موسوم به توالی پائولوس و دیگری پروتئین یوبی-کویتین نیز مد نظر قرار گرفت. توالی پائولوس به ترتیب ذکر شده در فوق و با لحاظ جایگاه های برشی مناسب با استفاده از روشهای سنتز ژن تهیه گردید و بالاخره دستواره ی سنتتیک pm2h (شامل شریک الحاق پائولوس، دایمر mbp8298 و توالی برچسبی 6his برای تخلیص نهائی پروتئین تراریختی) در ناقل بیانی pet-21c(+) همسانه سازی شد. توالی پائولوس که به منظور بهینه سازی آغاز ترجمه در بالا دست این دستواره تعبیه شده بود، بعد از کدون آغاز مشتمل بر یک توالی غنی ازنوکلئوتید های au و یک ساختار ساقه-حلقه (در مولکول mrna) بود. دستواره ی um2h که بجای شریک الحاق پائولوس دارای قطعه ی orf یوبی کوئیتین (جداسازی شده از گیاه medicago truncatula) بود نیز به همین طریق ساخته-شد و بالاخره به منظور مقایسه، دستواره ی سومی موسوم به m2h که فاقد شریک الحاق بود نیز ساخته شد. سه دستواره ی مذکور پس از توالی یابی به میزبان بیانی bl21(de3) منتقل و برای بیان پروتئین ترکیبی مورد نظر با iptg القاء شدند و میزان بیان پروتئین های تراریخت با استفاده از ژل sds-page مشاهده گردید. پروتئین های تراریخت um2h و pm2h به ترتیب در بخش مایع و اجسام متراکم باکتری مشاهده شدند. در حالی که پروتئین تراریخت m2h بر روی ژل مشاهده نشد. پروتئین های الحاقی تولید شده با کمک کروماتوگرافی جذبی بر روی ستون ni-nta با موفقیت خالص سازی شدند. در پایان نتیجه گیری شد که هر دو شریک الحاق پائولوس و یوبی کوئیتین سبب بیان بالای mbp8298 می شوند، در حالی که در غیاب آنها بیان پپتید مشاهده نمی شود. همچنین توالی پائولوس منجر به بیان محصول به صورت اجسام نامحلول و توالی یوبی کوئیتین منتهی به بیان محصول به صورت محلول می گردد. وجود و عملکرد برچسب 6his نشان می دهد که توالی پروتئین های مذکور با توالی مورد انتظار این ژن ها مطابقت دارد. این، اولین گزارش از بیان تراریختی پپتید دارویی mbp8298 می باشد.

۱۵ صفحه ی اول

برای دانلود 15 صفحه اول باید عضویت طلایی داشته باشید

اگر عضو سایت هستید لطفا وارد حساب کاربری خود شوید

منابع مشابه

همسانه سازی و بیان ژن پروتئین نوترکیب ویروس پیچیدگی برگ شلغم (tctv) در باکتری escherichia coli

چکیده ویروس پیچیدگی برگ شلغم ( turnip curly top virus, tctv) یک جمینی ویروسی جدید با ویژگی های منحصر به فرد است که در سال 1389 از ایران (فارس) گزارش شده است. مطالعه ویژگی های بیولوژیکی این ویروس، مستلزم برقراری یک روش ردیابی ویروس در طبیعت است. بدلیل کارائی بهتر روش های سرولوژیکی در شناسایی ویروس های گیاهی، در تحقیق حاضر اقدام به فراهم سازی بستری جهت تولید آنتی بادی و به تبع آن، ردیابی این ویر...

همسانه‌سازی و بیان ژن ناحیه یک فاکتور کشنده‌ی (Lethal Factor) باسیلوس آنتراسیس در باکتری Escherichia coli

زمینه و هدف: سیاه‌زخم (آنتراکس) یک بیماری مشترک بین انسان و دام است. عامل ایجاد کننده بیماری باکتری باسیلوس آنتراسیس می‌باشد که آنتی‌ژن حفاظت‌کننده (PA) و ناحیه یک فاکتور کشنده (LFD1) ایمونوژن‌های قوی این باکتری بوده و همواره به عنوان کاندیدای واکسن علیه باسیلوس آنتراسیس در نظر گرفته شده‌اند. هدف این مطالعه تولید آنتی‌ژن ناحیه یک فاکتور کشنده(LFD1) در باکتری Escherichia coli می‌باشد. روش بررسی:...

متن کامل

کلونینگ، بیان و تعیین خصوصیات لیپاز کایمریک باسیلوس ترموکاتنولاتوس در باکتری Escherichia coli

لیپازهای باکتریایی عضوی از خانواده β/α هیدرولازها هستند که تری آسیل گلیسرول ها را در فاز بین آب-چربی هیدرولیز می کنند. لیپاز باکتری باسیلوس ترموکاتنولاتوس (BTL2) در دمای 75-60 درجه سانتیگراد و pH برابر 10 -8 فعالیت دارد و مناسب استفاده در صنعت شوینده می باشد. در این پژوهش لیپاز باسیلوس ترموکاتنولاتوس کایمریک حاوی توالی توافق شده لیپاز قارچ کاندیداروگوزا (207Gly-Glu-Ser-Ala-Gly211)در ناحیه زانو...

متن کامل

کلونینگ و بیان ژن رمزگذار آنزیم تجزیه‌کننده ترکیبات آلی فسفره (opd) در باکتری Escherichia coli

کاربرد گستردۀ ترکیب‌های آلی فسفرۀ منجر به بروز اثر زیان‌آور زیست‌محیطی بسیاری شده است. استفاده از میکروارگانیسم­ها در پالایش و اندازه‌گیری این ترکیب‌های ناگوار به‌عنوان یک رویکرد دوستدار محیط­زیست و مناسب شناخته شده است. آنزیم ارگانوفسفروس هیدرولاز از آنزیم‌های هیدرولیزکنندۀ فسفوتری­استری است که در برخی میکروارگانیسم­های خاک به‌ویژه Flavobacterium sp.شناسایی شده و قادر به هیدرولیز تعدادی از ترک...

متن کامل

مطالعه بیان آنزیم لیپاز جدا شده از باکتری بی هوازی thermoanerobacter thermohydrosulfuricus در باکتری escherichia coli

در پژوهش حاضر هدف افزودن پپتید راهنما آنزیم متالوپرتئاز svp2 جدا شده از یک باکتری نمک دوست نسبی به ابتدای ژن آنزیم لیپاز ترموفیل و مقاوم به حلال های آلی، جدا شده از باکتری بی هوازی thermoanaerobacter thermohydrosulfuricus ، می باشد. بدین منظور دو جفت پرایمر با نام های ft، rt و rsp، fsp برای تکثیر قطعات ژنی مربوط به قطعه پپتید نشانه و آنزیم ttl طراحی گردید و pcr انجام شد. ابتدا قطعه ژن تکثیر شده...

منابع من

با ذخیره ی این منبع در منابع من، دسترسی به آن را برای استفاده های بعدی آسان تر کنید

ذخیره در منابع من قبلا به منابع من ذحیره شده

{@ msg_add @}


نوع سند: پایان نامه

وزارت علوم، تحقیقات و فناوری - دانشگاه صنعتی اصفهان - دانشکده کشاورزی

میزبانی شده توسط پلتفرم ابری doprax.com

copyright © 2015-2023